植物中總硒和氨基酸態(tài)硒的檢測(cè)方法

一、總硒的檢測(cè)

1. 樣品前處理

• 濕法消解：
  1. 取干燥植物樣品（0.5~1g，粉碎過(guò)80目篩）于消解管中，加入5mL HNO? + 2mL H?O?。
  2. 梯度升溫（80℃→120℃→180℃）消解至溶液澄清，冷卻后定容至25mL，過(guò)0.45μm濾膜。
• 微波消解（推薦）： 使用HNO? + HCl（3:1）混合酸，設(shè)置消解程序（180℃，30分鐘）。

2. 檢測(cè)方法

• ICP-MS法（高靈敏度，推薦）：
  • 儀器參數(shù)：RF功率1550W，載氣流速1.05L/min，監(jiān)測(cè)同位素??Se、?²Se（避免??Ar³?Cl干擾）。
  • 定量：外標(biāo)法或內(nèi)標(biāo)法（推薦¹?³In或?²Ge作內(nèi)標(biāo)）。
• 原子熒光光譜法（AFS）（低成本）：
  • 還原條件：KBH?（2%）+ HCl（5%），激發(fā)波長(zhǎng)196nm，檢測(cè)限≤0.01μg/L。

3. 注意事項(xiàng)

• 消解全程需避光，防止Se揮發(fā)；
• 空白對(duì)照：每批次需做試劑空白和基質(zhì)空白。

二、氨基酸態(tài)硒的檢測(cè)（硒代氨基酸分析）

1. 樣品前處理

• 酶解法：
  1. 取植物樣品（1g）加入10mL磷酸緩沖液（pH7.0），加入蛋白酶（如胰蛋白酶，1mg/mL）。
  2. 37℃水浴振蕩6小時(shí)，離心（10,000rpm，10min），上清液過(guò)0.22μm濾膜。

2. 分離與檢測(cè)

• HPLC-ICP-MS聯(lián)用（形態(tài)分析金標(biāo)準(zhǔn)）：
  • 色譜柱：C18反相柱（4.6×150mm，5μm）。
  • 流動(dòng)相：0.1%甲酸水溶液 + 甲醇（梯度洗脫，0~15min甲醇5%→30%）。
  • ICP-MS參數(shù)同總硒檢測(cè)，監(jiān)測(cè)??Se。
• HPLC-熒光檢測(cè)法（替代方案）：
  • 衍生化：OPA（鄰苯二甲醛）衍生氨基酸，激發(fā)波長(zhǎng)340nm，發(fā)射波長(zhǎng)450nm。

3. 定量方法

• 標(biāo)準(zhǔn)品：硒代蛋氨酸（SeMet）、硒代胱氨酸（SeCys）標(biāo)準(zhǔn)溶液，濃度梯度0~100μg/L。
• 回收率驗(yàn)證：加標(biāo)回收率需≥85%。

三、關(guān)鍵設(shè)備與試劑

質(zhì)控要求：

• 標(biāo)準(zhǔn)曲線R²≥0.999；
• 每批次樣品需帶平行樣（RSD≤10%）；
• 使用標(biāo)準(zhǔn)參考物質(zhì)（如NIST 1547桃葉）驗(yàn)證準(zhǔn)確性。

五、注意事項(xiàng)

1. 交叉污染：實(shí)驗(yàn)器皿需用10% HNO?浸泡過(guò)夜，超純水沖洗；
2. 形態(tài)穩(wěn)定性：硒代氨基酸易氧化，樣品需-80℃保存，避免反復(fù)凍融；
3. 干擾排除：ICP-MS中??Ar³?Cl干擾??Se，需啟用碰撞反應(yīng)池（He模式）。

通過(guò)上述方法，可精準(zhǔn)測(cè)定植物中總硒及氨基酸態(tài)硒含量，為營(yíng)養(yǎng)學(xué)研究和食品安全評(píng)估提供數(shù)據(jù)支持。建議結(jié)合植物品種與生長(zhǎng)環(huán)境優(yōu)化前處理流程。

檢測(cè)機(jī)構(gòu)資質(zhì)證書(shū)

CMA認(rèn)證

檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)資質(zhì)認(rèn)定證書(shū)

證書(shū)編號(hào)：241520345370

有效期至：2030年4月15日

CNAS認(rèn)可

實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可證書(shū)

證書(shū)編號(hào)：CNAS L22006

有效期至：2030年12月1日

ISO認(rèn)證

質(zhì)量管理體系認(rèn)證證書(shū)

證書(shū)編號(hào)：ISO9001-2024001

有效期至：2027年12月31日

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