植物多倍體檢測需圍繞 染色體計數、流式細胞術、形態(tài)學觀察 及 分子標記分析 等核心方法展開，結合國際標準（如流式細胞術的Galbraith法）及農業(yè)行業(yè)規(guī)范，適用于作物育種、種質資源鑒定和進化生物學研究。以下是系統化的檢測方案與操作指南：

一、核心檢測方法對比

二、染色體計數法（金標準）

1. 實驗步驟

1. 材料預處理：
   • 取根尖（1~2cm）或幼葉分生組織，浸泡于0.002M 8-羥基喹啉（4℃, 3h）以阻滯中期分裂。
2. 固定與解離：
   • 卡諾固定液（乙醇:冰醋酸=3:1）固定24h。
   • 60℃下1N HCl解離8~10分鐘（或酶解法：2%纖維素酶+1%果膠酶，37℃, 30min）。
3. 染色與制片：
   • 卡寶品紅染色15min，壓片后顯微鏡觀察（×1000油鏡）。

2. 結果判定

• 二倍體：染色體數目=2n（如水稻2n=24）。
• 四倍體：2n=4x（如四倍體西瓜2n=44）。
• 注意事項：
  • 至少統計30個中期細胞，確保≥85%細胞染色體數目一致。
  • 避免過度解離導致染色體碎裂。

三、流式細胞術（高效批量檢測）

1. 實驗流程

1. 樣本制備：
   • 取0.5cm²葉片，加入1mL Galbraith緩沖液（45mM MgCl?, 30mM檸檬酸鈉, 20mM MOPS, 0.1% Triton X-100, pH7.0），冰浴研磨。
2. 染色：
   • 過濾后加入50μg/mL碘化丙啶（PI）或DAPI，避光孵育30min。
3. 上機檢測：
   • 使用BD Accuri C6等流式細胞儀，激發(fā)波長488nm（PI）或355nm（DAPI）。

2. 數據分析

• 倍性判定：
  • 二倍體峰（2C）與四倍體峰（4C）的熒光強度比應為1:2。
  • 內標法：加入已知倍性標準品（如雞紅細胞，2.5pg DNA/細胞）校準。

四、形態(tài)學與生理指標輔助鑒定

五、分子標記法（SSR/SNP分析）

1. 實驗步驟

1. DNA提取：CTAB法提取植物基因組DNA。
2. 引物設計：選擇多態(tài)性SSR標記（如水稻RM1、RM5）。
3. PCR擴增：
   • 反應體系：10μL（含1U Taq酶，0.2mM dNTP，0.5μM引物）。
   • 程序：94℃ 5min → 35 cycles（94℃ 30s, 55℃ 30s, 72℃ 30s）→ 72℃ 5min。
4. 電泳分析：
   • 非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳（8%），銀染顯色。

2. 結果解讀

• 二倍體：每個位點最多2條帶（二體遺傳）。
• 四倍體：可能出現3~4條帶（同源四倍體）或2條帶但劑量差異（異源四倍體）。

六、注意事項與常見問題

七、應用場景

1. 作物育種：
   • 通過秋水仙素誘導多倍體，檢測四倍體西瓜（2n=44）以提高果實大小與抗逆性。
2. 種質資源鑒定：
   • 區(qū)分天然多倍體（如六倍體普通小麥）與雜交后代。
3. 生態(tài)進化研究：
   • 分析多倍體化對植物適應性（如四倍體鐵線蓮的耐寒性提升）。

通過系統化檢測，可精準鑒定植物倍性，為遺傳改良和基礎研究提供關鍵數據。建議根據實驗條件選擇方法：

• 快速篩查：流式細胞術（1小時/批）。
• 精準驗證：染色體計數法（需經驗）。
• 野外調查：形態(tài)學+氣孔特征輔助判斷。
• 分子機制研究：SSR/SNP標記結合基因組測序。

檢測機構資質證書

CMA認證

檢驗檢測機構資質認定證書

證書編號：241520345370

有效期至：2030年4月15日

CNAS認可

實驗室認可證書

證書編號：CNAS L22006

有效期至：2030年12月1日

ISO認證

質量管理體系認證證書

證書編號：ISO9001-2024001

有效期至：2027年12月31日

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