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結核分枝桿菌（TB）核酸擴增（PCR）熒光檢測試劑盒檢測

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發(fā)布時間：2025-08-28 18:27:06 更新時間：2025-08-27 18:27:09

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作者：中科光析科學技術研究所檢測中心

結核分枝桿菌（TB）核酸擴增（PCR）熒光檢測試劑盒檢測

結核分枝桿菌（Mycobacterium tuberculosis，簡稱TB）是引起結核病的主要病原體，其在全球范圍內(nèi)具有較高的發(fā)病率和死亡率。為了實現(xiàn)對TB的快速、準確診斷，現(xiàn)代醫(yī)學廣泛采用分子生物學技術，特別是基于聚合酶鏈反應（PCR）的熒光檢測方法。核酸擴增熒光檢測試劑盒作為一種高效的工具，能夠通過特異性擴增TB的DNA序列并利用熒光信號進行實時監(jiān)測，從而在早期階段識別感染，顯著提升檢測的敏感性和特異性。這種檢測方法不僅適用于臨床樣本（如痰液、血液或組織），還能用于篩查和監(jiān)測治療反應，對于結核病的防控具有重要價值。與傳統(tǒng)培養(yǎng)法相比，PCR熒光檢測大大縮短了檢測時間，通?？稍趲仔r內(nèi)得出結果，減少了患者等待時間，并降低了因延遲診斷導致的傳播風險。

檢測項目

本檢測項目主要針對結核分枝桿菌的核酸（DNA）進行特異性擴增和熒光檢測。具體包括：TB的特異性基因序列（如IS6110插入序列或rpoB基因）的定性分析，以確認樣本中是否存在TB病原體；同時，可進行半定量評估，輔助判斷感染負荷。檢測適用于多種臨床樣本類型，例如痰液、支氣管肺泡灌洗液、血液或組織活檢樣本。項目旨在提供快速、可靠的診斷結果，用于結核病的初篩、確診以及治療過程中的療效監(jiān)測。

檢測儀器

進行TB核酸擴增熒光檢測通常使用實時熒光定量PCR儀（qPCR儀），常見品牌包括羅氏（Roche）的LightCycler系列、ABI的QuantStudio系列或Bio-Rad的CFX系列。這些儀器能夠精確控制溫度循環(huán)（變性、退火、延伸），并實時監(jiān)測熒光信號的積累，從而實現(xiàn)對擴增產(chǎn)物的定量分析。此外，配套設備包括核酸提取儀（如QIAGEN的QIAcube或Roche的MagNA Pure系統(tǒng)），用于從樣本中純化DNA；以及移液器、離心機和生物安全柜，以確保操作的無污染和安全。儀器的校準和維護至關重要，需定期進行性能驗證，以保證檢測結果的準確性和重復性。

檢測方法

檢測方法基于實時熒光定量PCR技術，具體步驟包括：首先，從臨床樣本（如痰液）中提取TB的DNA，使用商業(yè)化核酸提取試劑盒去除抑制劑并純化核酸；其次，將純化后的DNA與特異性引物、探針（通常為TaqMan探針或SYBR Green染料）以及PCR master mix混合，置于qPCR儀中進行擴增。擴增過程包括初始變性（95°C）、循環(huán)步驟（變性、退火、延伸），并通過熒光檢測系統(tǒng)實時收集信號；最后，分析擴增曲線和閾值循環(huán)（Ct值），以判斷樣本是否為陽性（Ct值低于設定閾值）或陰性。該方法具有高靈敏度（可檢測低至幾個拷貝的DNA）和高特異性（通過探針設計避免交叉反應），整個流程通常在2-4小時內(nèi)完成。

檢測標準

檢測遵循國際和國內(nèi)相關標準以確保質(zhì)量和可靠性。主要標準包括：世界衛(wèi)生組織（WHO）的分子檢測指南、美國食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）的批準協(xié)議（如Xpert MTB/RIF assay），以及中國國家藥品監(jiān)督管理局（NMPA）的注冊要求。實驗室需實施質(zhì)量控制措施，如使用陽性對照（含TB DNA）和陰性對照（無模板對照）驗證每次運行的準確性；定期參與外部質(zhì)量評估計劃（如CDC或CAP的 proficiency testing）；并遵守生物安全規(guī)范（BSL-2或更高）。檢測結果的判讀基于預設的Ct值閾值，通常Ct值<40視為陽性，但需結合內(nèi)參基因（如人類β-actin）確認樣本質(zhì)量。標準操作程序（SOP）的遵循和文檔記錄是確保檢測一致性的關鍵。