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特應(yīng)性皮炎動(dòng)物模型檢測(cè)

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發(fā)布時(shí)間：2025-04-11 09:14:47 更新時(shí)間：2025-04-10 09:16:35

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作者：中科光析科學(xué)技術(shù)研究所檢測(cè)中心

特應(yīng)性皮炎（Atopic Dermatitis, AD）動(dòng)物模型檢測(cè)項(xiàng)目詳解

特應(yīng)性皮炎（AD）是一種慢性復(fù)發(fā)性炎癥性皮膚病，以皮膚屏障功能障礙、免疫異常和瘙癢為主要特征。動(dòng)物模型是研究AD發(fā)病機(jī)制和藥物篩選的重要工具，其檢測(cè)項(xiàng)目的合理選擇直接影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。本文圍繞AD動(dòng)物模型的檢測(cè)項(xiàng)目展開，系統(tǒng)介紹從表型評(píng)估到分子機(jī)制的多維度檢測(cè)方法。

一、AD動(dòng)物模型構(gòu)建概述

常用模型包括：

自發(fā)型模型：如NC/Nga小鼠（需環(huán)境觸發(fā)）。
誘導(dǎo)型模型：DNCB（二硝基氯苯）、MC903（維生素D3類似物）或卵清蛋白（OVA）等化學(xué)/免疫誘導(dǎo)。
基因工程模型：如FLG基因敲除（模擬皮膚屏障缺陷）。

二、核心檢測(cè)項(xiàng)目及方法

1. 皮膚表型評(píng)估

肉眼觀察評(píng)分
- 指標(biāo)：紅斑、水腫、表皮脫落、結(jié)痂、苔蘚化。
- 評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：按嚴(yán)重程度分級(jí)（0-3分），總分反映疾病進(jìn)展。
- 意義：直接評(píng)估模型是否成功模擬AD的臨床特征。
皮膚厚度測(cè)量
- 方法：游標(biāo)卡尺或超聲檢測(cè)儀測(cè)量病變部位厚度。
- 意義：表皮增生和真皮水腫的定量指標(biāo)。

2. 組織病理學(xué)檢測(cè)

HE染色
- 觀察指標(biāo)：
  - 表皮增厚（棘層肥厚）
  - 炎性細(xì)胞浸潤(rùn)（嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞）
  - 真皮血管擴(kuò)張
- 評(píng)分系統(tǒng)：根據(jù)炎癥程度和表皮異常進(jìn)行半定量評(píng)分。
免疫組化（IHC）與免疫熒光（IF）
- 檢測(cè)靶點(diǎn)：
  - 炎癥介質(zhì)：IL-4、IL-13、IL-31（Th2型細(xì)胞因子）
  - 屏障蛋白：絲聚蛋白（Filaggrin）、兜甲蛋白（Loricrin）
  - 神經(jīng)標(biāo)志物：SP（P物質(zhì)）、NGF（神經(jīng)生長(zhǎng)因子）

3. 皮膚屏障功能檢測(cè)

經(jīng)皮水分流失（TEWL）
- 設(shè)備：Tewameter®
- 原理：測(cè)量皮膚表面水分蒸發(fā)速率，數(shù)值越高表明屏障破壞越嚴(yán)重。
角質(zhì)層含水量
- 設(shè)備：Corneometer®
- 意義：AD模型中皮膚干燥程度的客觀指標(biāo)。
染料滲透實(shí)驗(yàn)
- 方法：異硫氰酸熒光素（FITC）或伊文思藍(lán)涂抹皮膚，檢測(cè)滲透量。
- 意義：評(píng)估表皮通透性改變。

4. 免疫學(xué)與血清學(xué)指標(biāo)

血清IgE水平
- 方法：ELISA檢測(cè)總IgE和抗原特異性IgE（如OVA-IgE）。
- 意義：反映Th2型免疫應(yīng)答強(qiáng)度。
細(xì)胞因子檢測(cè)
- 樣本：血清、皮膚勻漿液或引流淋巴結(jié)細(xì)胞培養(yǎng)上清。
- 靶點(diǎn)：
  - Th2型：IL-4、IL-5、IL-13
  - Th1型：IFN-γ
  - Th17型：IL-17A
  - 瘙癢相關(guān)：IL-31、TSLP（胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素）
流式細(xì)胞術(shù)
- 分析對(duì)象：脾臟或淋巴結(jié)中的T細(xì)胞亞群（Th1/Th2/Th17/Treg比例）。

5. 瘙癢行為學(xué)評(píng)估

抓撓次數(shù)記錄
- 方法：
  - 視頻監(jiān)控系統(tǒng)（自動(dòng)分析動(dòng)物抓撓動(dòng)作）
  - 磁環(huán)傳感器（穿戴式設(shè)備記錄肢體活動(dòng)）
- 意義：量化瘙癢嚴(yán)重程度，關(guān)聯(lián)IL-31等致癢因子水平。

6. 分子機(jī)制研究

qPCR
- 靶基因：
  - 炎癥通路：NF-κB、STAT3
  - 皮膚屏障相關(guān)：FLG、LOR、CLDN1（緊密連接蛋白）
  - 蛋白酶：KLK5/7（激肽釋放酶，參與屏障破壞）
Western Blot
- 檢測(cè)蛋白：Filaggrin、LOR、炎癥小體（NLRP3）等。
轉(zhuǎn)錄組與蛋白組學(xué)
- 應(yīng)用：篩選差異表達(dá)基因/蛋白，揭示AD新機(jī)制。

7. 微生物組分析

16S rRNA測(cè)序
- 樣本：皮膚拭子或糞便
- 意義：AD模型中金黃色葡萄球菌定植與菌群失調(diào)的關(guān)聯(lián)。

三、檢測(cè)項(xiàng)目選擇策略

根據(jù)模型特點(diǎn)：
- 化學(xué)誘導(dǎo)模型側(cè)重Th2炎癥和IgE升高檢測(cè)。
- 基因編輯模型需優(yōu)先評(píng)估屏障蛋白表達(dá)。
階段依賴性：
- 急性期：TEWL、Th2細(xì)胞因子、抓撓行為。
- 慢性期：表皮增厚、纖維化、Th1/Th17偏移。
轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)意義：
- 結(jié)合臨床AD標(biāo)志物（如Filaggrin缺失、IL-4Rα通路）設(shè)計(jì)檢測(cè)。

四、注意事項(xiàng)

動(dòng)物種系：C57BL/6小鼠Th1應(yīng)答強(qiáng)，BALB/c小鼠傾向Th2反應(yīng)。
檢測(cè)時(shí)間點(diǎn)：動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)（如致敏期、激發(fā)期、慢性期）。
標(biāo)準(zhǔn)化操作：環(huán)境溫濕度、麻醉方式可能影響TEWL結(jié)果。
局限性：動(dòng)物模型無法完全模擬人類AD的復(fù)雜免疫網(wǎng)絡(luò)。

五、總結(jié)

AD動(dòng)物模型的檢測(cè)需整合表型、組織學(xué)、免疫學(xué)及分子生物學(xué)多維度數(shù)據(jù)，以全面評(píng)估皮膚屏障、免疫失衡和瘙癢環(huán)路。檢測(cè)項(xiàng)目的選擇應(yīng)緊扣實(shí)驗(yàn)?zāi)康?，同時(shí)結(jié)合新興技術(shù)（如單細(xì)胞測(cè)序、空間轉(zhuǎn)錄組）深入解析AD機(jī)制，為藥物研發(fā)提供可靠依據(jù)。