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原代誘導的巨噬細胞系檢測

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發(fā)布時間：2025-04-10 16:37:56 更新時間：2025-04-09 16:40:37

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作者：中科光析科學技術(shù)研究所檢測中心

原代誘導巨噬細胞系的檢測項目及方法

一、引言

原代誘導的巨噬細胞是通過體外分化單核細胞（如人外周血單核細胞或小鼠骨髓單核細胞）獲得的免疫細胞模型，廣泛應用于炎癥、感染、腫瘤免疫等領域的研究。為確保細胞功能及實驗結(jié)果的可靠性，需通過多項檢測評估其表型、活性和功能狀態(tài)。本文重點闡述原代誘導巨噬細胞的關(guān)鍵檢測項目及實驗方法。

二、主要檢測項目及方法

1. 形態(tài)學觀察

目的：確認巨噬細胞分化狀態(tài)及健康程度。方法：

光學顯微鏡觀察：誘導后48-72小時，在倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)。分化成熟的巨噬細胞呈梭形、星形或不規(guī)則貼壁生長。
掃描電鏡（SEM）：觀察表面?zhèn)巫?、褶皺等超微結(jié)構(gòu)。

2. 表面標志物檢測

目的：驗證巨噬細胞特異性標記物的表達。 常用標記物：

人源巨噬細胞：CD14（單核/巨噬細胞標記）、CD68、CD163（M2型）、HLA-DR（M1型）。
小鼠巨噬細胞：F4/80、CD11b、CD206（M2型）、iNOS（M1型）。

檢測方法：

流式細胞術(shù)：細胞懸液經(jīng)抗體孵育后，通過流式分析陽性率。
免疫熒光/免疫組化：貼壁細胞固定后，用熒光或酶標抗體染色觀察。

3. 吞噬功能檢測

目的：評估巨噬細胞的吞噬活性。方法：

熒光微球吞噬實驗：將熒光標記的聚苯乙烯微球（1-2 μm）與細胞共孵育2-4小時，洗滌后通過流式或熒光顯微鏡定量吞噬效率。
細菌吞噬實驗：使用FITC標記的大腸桿菌或金黃色葡萄球菌，檢測吞噬后細胞內(nèi)熒光強度。

4. 細胞因子分泌檢測

目的：分析巨噬細胞極化狀態(tài)（M1/M2）及炎癥反應能力。 檢測指標：

促炎型（M1）：TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-12。
抗炎型（M2）：IL-10、TGF-β、Arg-1。

方法：

ELISA：收集細胞上清液，定量檢測細胞因子濃度。
qRT-PCR：提取細胞RNA，檢測細胞因子mRNA表達水平。

5. 活性氧（ROS）檢測

目的：評估巨噬細胞的氧化爆發(fā)能力。方法：

DCFH-DA探針法：細胞與DCFH-DA孵育30分鐘，熒光顯微鏡或酶標儀檢測綠色熒光強度（激發(fā)485 nm，發(fā)射535 nm）。
流式細胞術(shù)：通過熒光信號定量ROS水平。

6. 遷移能力檢測

目的：研究巨噬細胞的趨化運動能力。方法：

Transwell小室實驗：將細胞接種于上室，下室加入趨化因子（如CCL2、MCP-1），24小時后計數(shù)下室遷移細胞數(shù)。
劃痕愈合實驗：在貼壁細胞層制造劃痕，觀察24-48小時內(nèi)的遷移修復情況。

7. 基因表達分析

目的：檢測巨噬細胞極化相關(guān)基因表達。 關(guān)鍵基因：

M1標志基因：iNOS、TNF-α、IL-6。
M2標志基因：Arg-1、Ym1、CD206。方法：qRT-PCR或RNA-Seq。

8. 細胞活力與凋亡檢測

目的：評估誘導或處理后的細胞活性。方法：

CCK-8法：檢測細胞代謝活性。
Annexin V/PI雙染：流式細胞術(shù)分析凋亡率。

三、數(shù)據(jù)解讀與注意事項

對照設置：需包括未誘導的單核細胞對照和陽性/陰性對照組（如LPS+IFN-γ誘導M1，IL-4+IL-13誘導M2）。
標準化處理：確保細胞密度、誘導劑濃度和培養(yǎng)時間一致。
功能與表型關(guān)聯(lián)：需結(jié)合表面標志物與功能檢測（如M1型應高分泌IL-6且低表達CD206）。

四、參考文獻

Murray, P. J. et al. (2014). Macrophage activation and polarization: nomenclature and experimental guidelines. Immunity, 41(1), 14-20.
Ginhoux, F., & Guilliams, M. (2016). Tissue-resident macrophage ontogeny and homeostasis. Immunity, 44(3), 439-449.

通過上述檢測項目，可全面評估原代誘導巨噬細胞的表型、功能及實驗適用性，為后續(xù)機制研究提供可靠數(shù)據(jù)支持。