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細(xì)菌微生物計(jì)數(shù)檢測(cè)

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發(fā)布時(shí)間：2025-03-26 10:10:18 更新時(shí)間：2025-03-25 10:10:28

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作者：中科光析科學(xué)技術(shù)研究所檢測(cè)中心

細(xì)菌微生物計(jì)數(shù)是評(píng)估樣品衛(wèi)生質(zhì)量的核心指標(biāo)，廣泛應(yīng)用于食品、藥品、水質(zhì)及醫(yī)療環(huán)境監(jiān)測(cè)。檢測(cè)需符合以下標(biāo)準(zhǔn)：

國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)：ISO 4833（食品微生物計(jì)數(shù)）、USP <61>（藥品微生物限度）、ISO 6222（水質(zhì)菌落總數(shù)）。
中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)：GB 4789.2（食品微生物檢驗(yàn)）、GB/T 5750.12（生活飲用水微生物檢測(cè)）、CP（中國(guó)藥典）四部通則。

適用場(chǎng)景：低菌量樣品（如純凈水、注射用水）。
步驟：
1. 過濾：取100-1000mL樣品通過0.45μm濾膜，截留微生物。
2. 轉(zhuǎn)移培養(yǎng)：將濾膜貼于瓊脂培養(yǎng)基（如m-HPC培養(yǎng)基）。
3. 培養(yǎng)計(jì)數(shù)：30℃×72小時(shí)，計(jì)數(shù)濾膜上菌落。

方法	原理	時(shí)間	適用場(chǎng)景
ATP生物發(fā)光法	檢測(cè)微生物ATP含量，光信號(hào)與菌量成正比	5-10分鐘	表面衛(wèi)生快速篩查
阻抗法	微生物代謝改變培養(yǎng)基電導(dǎo)率	6-24小時(shí)	乳制品、飲料中的活菌檢測(cè)
流式細(xì)胞術(shù)	熒光標(biāo)記微生物后激光計(jì)數(shù)	1-2小時(shí)	高靈敏度（檢測(cè)限≤10 CFU/mL）
qPCR/數(shù)字PCR	定量特定基因（如16S rRNA）	3-6小時(shí)	病原菌快速定量（如沙門氏菌）

無菌操作：
- 超凈臺(tái)/生物安全柜中操作，定期驗(yàn)證潔凈度（沉降菌≤1 CFU/皿）。
- 培養(yǎng)基預(yù)培養(yǎng)：隨機(jī)抽取2%瓊脂平板，36℃培養(yǎng)24小時(shí)，確認(rèn)無菌落。
稀釋精度：
- 移液器定期校準(zhǔn)（誤差≤±1%），每稀釋梯度更換槍頭。
數(shù)據(jù)記錄：
- 記錄稀釋梯度、培養(yǎng)條件、異?，F(xiàn)象（如蔓延菌落需標(biāo)注）。

問題	原因分析	解決方案
菌落過度蔓延	樣品含高濃度菌或瓊脂過薄	增加稀釋梯度，傾注瓊脂厚度≥15mm
零稀釋度無生長(zhǎng)	樣品含抑菌成分或處理不當(dāng)	中和處理（如D/E中和肉湯），調(diào)整前處理步驟
假陽(yáng)性/假陰性	培養(yǎng)基污染或PCR引物非特異	設(shè)置陰性/陽(yáng)性對(duì)照，優(yōu)化引物特異性

合格標(biāo)準(zhǔn)（示例）：
- 食品：預(yù)包裝食品菌落總數(shù)≤10? CFU/g（GB 4789.2）。
- 飲用水：菌落總數(shù)≤100 CFU/mL（GB 5749-2022）。
- 藥品：非無菌制劑需符合CP四部微生物限度要求。
報(bào)告格式：
- 樣品信息（名稱、批號(hào)、采樣日期）。
- 檢測(cè)方法（如GB 4789.2-2022）。
- 結(jié)果（CFU/g或CFU/mL）與判定結(jié)論。