氨基酸檢測(cè)
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發(fā)布時(shí)間:2025-03-10 09:27:03 更新時(shí)間:2025-03-09 09:29:37
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作者:中科光析科學(xué)技術(shù)研究所檢測(cè)中心

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作者:中科光析科學(xué)技術(shù)研究所檢測(cè)中心
氨基酸檢測(cè)是食品、醫(yī)藥、生物研究等領(lǐng)域的關(guān)鍵分析項(xiàng)目,其精準(zhǔn)測(cè)定對(duì)營養(yǎng)評(píng)估、疾病診斷及工藝優(yōu)化至關(guān)重要。本文系統(tǒng)解析氨基酸檢測(cè)的核心方法、標(biāo)準(zhǔn)流程及前沿技術(shù),涵蓋樣品前處理、儀器分析及數(shù)據(jù)解讀全流程。
參數(shù) | 條件設(shè)置 | 優(yōu)勢(shì) |
---|---|---|
分離原理 | 陽離子交換柱(磺酸基團(tuán)) + 梯度洗脫 | 高特異性,可分離40+種氨基酸 |
檢測(cè)方式 | 茚三酮柱后衍生 + 可見光檢測(cè)(570nm) | 靈敏度高(0.1-1nmol) |
標(biāo)準(zhǔn)依據(jù) | GB 5009.124-2016(食品) | 適用于食品、飼料等復(fù)雜基質(zhì) |
設(shè)備型號(hào) | Hitachi L-8900、Sykam S433 | 分析時(shí)間:60-120min |
流程示例(食品樣品):
參數(shù) | 條件設(shè)置 | 應(yīng)用場(chǎng)景 |
---|---|---|
色譜柱 | C18反相柱(250×4.6mm,5μm) | 游離氨基酸分析(無需水解) |
衍生試劑 | OPA(鄰苯二甲醛)/FMOC(氯甲酸芴甲酯) | OPA衍生伯胺,F(xiàn)MOC衍生仲胺 |
檢測(cè)器 | 熒光檢測(cè)器(Ex 340nm/Em 450nm) | 靈敏度達(dá)pmol級(jí) |
標(biāo)準(zhǔn)方法 | AOAC 994.12(乳制品) | 適用于血漿、尿液等生物樣本 |
關(guān)鍵步驟:
參數(shù) | 條件設(shè)置 | 優(yōu)勢(shì) |
---|---|---|
離子源 | ESI(電噴霧電離)或APCI(大氣壓化學(xué)電離) | 高靈敏度(fg級(jí)),免衍生化 |
質(zhì)譜模式 | MRM(多反應(yīng)監(jiān)測(cè)) | 抗干擾能力強(qiáng),適合復(fù)雜基質(zhì) |
應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn) | ISO 13903:2005(動(dòng)物飼料) | 可同時(shí)檢測(cè)D/L型氨基酸 |
典型條件:
步驟 | 操作要點(diǎn) | 注意事項(xiàng) |
---|---|---|
酸水解 | 6M HCl,110℃,24h(含1%苯酚防氧化) | 色氨酸被破壞,需另用堿水解 |
堿水解 | 4M NaOH,110℃,20h(測(cè)色氨酸) | 避免半胱氨酸、絲氨酸降解 |
酶水解 | 胰蛋白酶/蛋白酶K,37℃,48h | 保留氨基酸構(gòu)型,速度慢 |
基質(zhì)類型 | 提取方法 | 凈化策略 |
---|---|---|
食品/飼料 | 0.1M HCl超聲提取30min | 超濾(10kDa膜)去蛋白質(zhì) |
血漿/血清 | 乙腈沉淀蛋白(1:3,v/v) | 離心后取上清液過濾(0.22μm) |
植物組織 | 液氮研磨 + 80%甲醇提取 | 固相萃取(SCX柱)去色素 |
標(biāo)準(zhǔn)號(hào) | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 核心要求 |
---|---|---|
GB 5009.124-2016 | 食品中氨基酸測(cè)定(酸水解-氨基酸分析儀) | 回收率85-110%,RSD≤5% |
AOAC 994.12 | 乳制品中游離氨基酸(HPLC-OPA衍生) | 檢出限≤0.01g/100g |
ISO 13903:2005 | 動(dòng)物飼料氨基酸分析(LC-MS/MS) | 定量限≤0.1mg/kg |
問題現(xiàn)象 | 原因分析 | 解決方案 |
---|---|---|
色譜峰分不開 | 梯度洗脫程序不佳或柱效下降 | 優(yōu)化流動(dòng)相梯度,更換色譜柱 |
回收率偏低 | 水解不完全或衍生化效率低 | 延長(zhǎng)水解時(shí)間,驗(yàn)證衍生條件 |
基質(zhì)干擾嚴(yán)重 | 樣品雜質(zhì)過多(如色素、脂類) | 加強(qiáng)凈化步驟(SPE/超濾) |
通過精準(zhǔn)的氨基酸檢測(cè),可深入解析樣品營養(yǎng)構(gòu)成與代謝狀態(tài)。建議根據(jù)樣品類型選擇氨基酸分析儀法(高通量)或LC-MS/MS(高靈敏度),并通過ISO 17025認(rèn)證實(shí)驗(yàn)室確保數(shù)據(jù)可靠性。
證書編號(hào):241520345370
證書編號(hào):CNAS L22006
證書編號(hào):ISO9001-2024001
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