螢光素酶是理想的報(bào)告基因，因?yàn)椴溉閯?dòng)物細(xì)胞中不含內(nèi)源性螢光素酶，一旦轉(zhuǎn)錄完成立刻就生成功能性的螢光素酶。單報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)往往會(huì)受到各種實(shí)驗(yàn)條件的影響，而雙報(bào)告基因則通過共轉(zhuǎn)染的“對(duì)照”作為內(nèi)參為試驗(yàn)提供一基準(zhǔn)線，從而可以在最大程度上減小細(xì)胞活性和轉(zhuǎn)染效率等外在因素對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響，使得數(shù)據(jù)結(jié)果更為可信。Dual-Luciferase®雙螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)在細(xì)胞中同時(shí)表達(dá)螢火蟲螢光素酶和海腎螢光素酶，兩者沒有種源同源性并對(duì)應(yīng)不同的反應(yīng)底物，故而沒有交叉干擾。得益于超強(qiáng)的光信號(hào)和超高的信噪比。
miRNA靶基因驗(yàn)證
miRNA主要通過作用于靶基因的3’UTR起作用（降解或抑制翻譯），將目的基因3’UTR（野生型和結(jié)合位點(diǎn)突變型）序列構(gòu)建至載體中報(bào)告基因F-Luc的3’端，通過比較過表達(dá)miRNA后，報(bào)告基因表達(dá)的改變（螢光素酶的活性下降還是不變），來確定miRNA與靶基因3’UTR的作用位點(diǎn)。
目的：驗(yàn)證 miRNA與靶基因3’UTR 是否發(fā)生調(diào)控作用。
材料：質(zhì)粒pMIR-REPORT Luciferase基因3'UTR（Wt）；pMIR-REPORT Luciferase-基因3'UTR（Mut）；pRL-CMV（H321，Promega）；293T細(xì)胞株
步驟：靶點(diǎn)預(yù)測(cè)——構(gòu)建質(zhì)粒——轉(zhuǎn)染細(xì)胞檢測(cè)——報(bào)告基因檢測(cè)（Luciferase活性檢測(cè)）——統(tǒng)計(jì)分析
結(jié)果展示：
啟動(dòng)子活性研究
轉(zhuǎn)錄因子是一種具有特殊結(jié)構(gòu)、行使調(diào)控基因表達(dá)功能的蛋白質(zhì)分子，也稱為反式作用因子。某些轉(zhuǎn)錄因子僅與其靶啟動(dòng)子中的特異序列結(jié)合，這些特異性的序列被稱為順式因子，轉(zhuǎn)錄因子的DNA結(jié)合域和順式因子實(shí)現(xiàn)共價(jià)結(jié)合，從而對(duì)基因的表達(dá)起抑制或增強(qiáng)的作用。
轉(zhuǎn)錄因子主要通過作用于靶基因的啟動(dòng)子起作用，將目的基因啟動(dòng)子區(qū)序列替換報(bào)告基因F-Luc的啟動(dòng)子，通過共表達(dá)轉(zhuǎn)錄因子后，報(bào)告基因表達(dá)的改變，來確定轉(zhuǎn)錄因子與靶基因啟動(dòng)子結(jié)合位點(diǎn)及對(duì)靶基因的作用。
目的：檢測(cè)轉(zhuǎn)錄因子對(duì)目的基因啟動(dòng)子活性的影響
材料：實(shí)驗(yàn)質(zhì)粒（pGL4.10-基因promotor）；對(duì)照質(zhì)粒； pRL-CMV（E2261，Promega）；轉(zhuǎn)錄因子質(zhì)粒；293T細(xì)胞株
步驟：靶點(diǎn)預(yù)測(cè)——構(gòu)建質(zhì)粒——轉(zhuǎn)染細(xì)胞檢測(cè)——報(bào)告基因檢測(cè)（Luciferase活性檢測(cè)）——統(tǒng)計(jì)分析
結(jié)果展示：
客戶需提供信息：
1 靶基因名稱
2 靶基因種屬
3 調(diào)控因子（miRNA或者轉(zhuǎn)錄因子）名稱
提供給客戶：
1 結(jié)合位點(diǎn)預(yù)測(cè)結(jié)果
2 質(zhì)粒及其構(gòu)建報(bào)告
3 雙熒光素酶檢測(cè)報(bào)告
CMA認(rèn)證
檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)資質(zhì)認(rèn)定證書
證書編號(hào)：241520345370
有效期至：2030年4月15日
CNAS認(rèn)可
實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可證書
證書編號(hào)：CNAS L22006
有效期至：2030年12月1日
ISO認(rèn)證
質(zhì)量管理體系認(rèn)證證書
證書編號(hào)：ISO9001-2024001
有效期至：2027年12月31日
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