溶血性鏈球菌溶血素試驗（抗鏈球菌溶血素O試驗 - ASO試驗）
溶血性鏈球菌，特別是A群溶血性鏈球菌，是引起人類多種感染性疾病的重要病原體，如咽炎、扁桃體炎、猩紅熱等。部分患者在感染后可能發(fā)生非化膿性并發(fā)癥，如風(fēng)濕熱和急性腎小球腎炎。這些并發(fā)癥的發(fā)生與機體針對鏈球菌產(chǎn)生的免疫反應(yīng)密切相關(guān)。鏈球菌溶血素O（SLO）是A群溶血性鏈球菌產(chǎn)生的一種重要的外毒素，具有強溶血活性，且具有很強的抗原性。當(dāng)人體感染溶血性鏈球菌后，免疫系統(tǒng)會產(chǎn)生針對SLO的抗體，即抗鏈球菌溶血素O抗體（ASO）。血清中ASO抗體的檢測，對于診斷近期或反復(fù)的A群溶血性鏈球菌感染及其引發(fā)的風(fēng)濕熱、腎小球腎炎等非化膿性并發(fā)癥具有重要的輔助價值。該試驗是目前臨床應(yīng)用最廣泛的用于證實鏈球菌感染的血清學(xué)方法之一，尤其對于臨床癥狀不典型或未能分離培養(yǎng)出病原體的病例意義重大。定期監(jiān)測ASO滴度變化有助于評估疾病活動性、治療反應(yīng)和轉(zhuǎn)歸。
檢測項目
核心檢測項目為：血清抗鏈球菌溶血素O抗體（Anti-Streptolysin O Antibody, ASO）滴度或濃度。
檢測目的主要包括：
- 輔助診斷近期或反復(fù)的A群溶血性鏈球菌感染。
- 輔助診斷由A群溶血性鏈球菌感染引起的非化膿性并發(fā)癥，如風(fēng)濕熱（特別是風(fēng)濕性心臟炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎）、鏈球菌感染后腎小球腎炎（PSGN）。
- 監(jiān)測風(fēng)濕熱或鏈球菌感染后腎小球腎炎患者的病情活動度和治療效果。
- 流行病學(xué)調(diào)查。
檢測儀器
進行ASO檢測通常需要以下儀器設(shè)備：
- 免疫比濁儀/特定蛋白分析儀： 目前最常用的自動化儀器，用于速率散射比濁法或透射比濁法檢測。儀器自動加樣、混合、溫育、測定吸光度或散射光變化并計算濃度。
- 酶標(biāo)儀： 用于酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。讀取微孔板中反應(yīng)后溶液的吸光度值（OD值）。
- 分光光度計： 用于傳統(tǒng)的手工溶血抑制試驗（Todd法），在特定波長（通常為540nm左右，針對血紅蛋白）下測定反應(yīng)混合物的吸光度來判斷溶血程度。
- 恒溫水浴箱/干式恒溫器： 為某些反應(yīng)步驟（如ELISA的溫育、Todd法的紅細(xì)胞溶解）提供精確的溫度控制（通常為37°C）。
- 微量移液器及移液槍頭： 用于精確移取樣本和試劑。
- 離心機： 用于分離血清樣本（若使用全血）。
- 振蕩混勻器： 用于充分混勻反應(yīng)液（在ELISA、膠乳凝集法中常用）。
- 反應(yīng)板/反應(yīng)卡片/試管： 不同方法所需的反應(yīng)容器（如96孔板用于ELISA，凝集卡片或玻片用于膠乳凝集法，試管用于Todd法）。
檢測方法
ASO檢測主要采用以下幾種免疫學(xué)方法：
- 膠乳凝集試驗（Latex Agglutination Test, LAT）：
- 原理： 將純化的SLO抗原包被在膠乳顆粒表面。當(dāng)待測血清中存在ASO抗體時，抗體與膠乳顆粒上的抗原結(jié)合，形成肉眼可見的凝集顆粒。
- 操作： 將血清樣本（通常需稀釋）與膠乳試劑在反應(yīng)卡或玻片上混合，手動或儀器振蕩混勻，一定時間（如2-3分鐘）后觀察凝集情況。凝集為陽性。
- 特點： 操作簡便快速（數(shù)分鐘出結(jié)果），成本較低，無需特殊儀器，適用于基層或急診篩查。但為半定量或定性（常報告為滴度如1:200, 1:400等，或用“+”表示強度），敏感性低于定量方法，易受主觀判斷影響。
- 酶聯(lián)免疫吸附試驗（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA）：
- 原理： 采用雙抗體夾心法或間接法。常用間接法：包被SLO抗原 → 加入待測血清（含ASO抗體） → 加入酶標(biāo)記的抗人IgG抗體 → 加入底物顯色。顯色深淺與ASO抗體量成正比。
- 操作： 步驟較多，包括包被、封閉、加樣、溫育、洗滌、加酶標(biāo)抗體、再溫育、洗滌、加底物、終止反應(yīng)、讀板（酶標(biāo)儀測OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算濃度（通常為IU/mL）。
- 特點： 靈敏度高，特異性好，可定量檢測，通量高（適用于批量檢測）。但操作步驟繁瑣耗時長，需要專業(yè)人員和儀器（酶標(biāo)儀、洗板機），易受洗滌效果等因素影響。
- 免疫比濁法（Immunoturbidimetric Assay）：
- 原理： 分為透射比濁法和散射比濁法（速率法更常用）。待測血清中的ASO抗體與試劑中的SLO抗原結(jié)合，形成抗原-抗體復(fù)合物，導(dǎo)致反應(yīng)液濁度增加（透射光減弱或散射光增強）。該變化程度與ASO抗體濃度成正比。
- 操作： 高度自動化。儀器自動吸取樣本、試劑，混合溫育，連續(xù)監(jiān)測特定波長下的吸光度或散射光變化速率，自動計算濃度（IU/mL）。
- 特點： 操作簡便快速（數(shù)分鐘），精密度高，可準(zhǔn)確定量，自動化程度高，結(jié)果穩(wěn)定，是目前大中型臨床實驗室的主流方法。儀器和試劑成本相對較高。
- 溶血抑制試驗（Todd法 - 傳統(tǒng)方法，已較少使用）：
- 原理： SLO能溶解紅細(xì)胞（如兔或人O型紅細(xì)胞）。待測血清中的ASO抗體能中和SLO的溶血活性。通過觀察或定量測定未被中和的SLO所導(dǎo)致的殘余溶血程度，來推算ASO抗體的滴度。
- 操作： 將系列稀釋的血清與已知量的SLO毒素混合，溫育后加入紅細(xì)胞懸液，再次溫育后離心，觀察上清液溶血程度或測定540nm吸光度。以完全抑制溶血的最高血清稀釋度作為ASO滴度。
- 特點： 是經(jīng)典的參考方法，但操作復(fù)雜耗時（數(shù)小時），需要制備和標(biāo)定SLO毒素及紅細(xì)胞，精密度較差，生物安全要求高，現(xiàn)已基本被上述免疫學(xué)方法取代。
檢測標(biāo)準(zhǔn)與結(jié)果解讀
ASO檢測結(jié)果受年齡、地域、季節(jié)、檢測方法等因素影響，實驗室應(yīng)建立或驗證自己的參考區(qū)間（通常以IU/mL報告）。常見參考區(qū)間上限約為：
- 成人： 200 IU/mL
- 兒童（<5歲）： 可能更高（如160 IU/mL）
- 兒童（5-15歲）： 240-320 IU/mL
結(jié)果解讀要點：
- 陰性： ASO水平低于參考上限，通常不支持近期鏈球菌感染。但抗體產(chǎn)生需要時間（感染后1周開始上升，3-6周達峰），早期檢測可能陰性。
- 陽性： ASO水平升高（>參考上限），提示近期（通常指1-2月內(nèi)）或反復(fù)的A群溶血性鏈球菌感染。單次升高有提示意義。
- 顯著升高或動態(tài)升高更具診斷價值： 對于風(fēng)濕熱或PSGN的診斷，ASO滴度顯著升高（如成人>400-500 IU/mL，兒童更高）或連續(xù)檢測（間隔2-4周）
CMA認(rèn)證
檢驗檢測機構(gòu)資質(zhì)認(rèn)定證書
證書編號：241520345370
有效期至：2030年4月15日
CNAS認(rèn)可
實驗室認(rèn)可證書
證書編號：CNAS L22006
有效期至：2030年12月1日
ISO認(rèn)證
質(zhì)量管理體系認(rèn)證證書
證書編號：ISO9001-2024001
有效期至：2027年12月31日
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