| 資源中文名稱 |
手足口病柯薩奇病毒A10型腹腔感染小鼠模型 |
| 資源英文名稱 |
Coxsackievirus A10 infected mice model |
| 疾病概述 |
手足口病是由腸道病毒引起的傳染病，多發(fā)生于5歲以下兒童，表現(xiàn)口痛、厭食、低熱、手、足、口腔等部位出現(xiàn)小皰疹或小潰瘍，多數(shù)患兒一周左右自愈，少數(shù)患兒可引起心肌炎、肺水腫、無菌性腦膜腦炎等并發(fā)癥。個別重癥患兒病情發(fā)展快，導(dǎo)致死亡。引發(fā)手足口病的腸道病毒有20多種（型），自2008年在新加坡的暴發(fā)流行，柯薩奇病毒A10型（Coxsackievirus A10，CA10）成為手足口病主要致病血清型之一，由其感染引起的手足口病爆發(fā)事件在法國、芬蘭、印度等國家和地區(qū)不斷被報道。2013年以前，中國多地區(qū)暴發(fā)流行的手足口病病原以EV71和CA16為主，CA6和CA10次之。2013年以后，CA10引起的手足口病比例逐漸上升，成為國內(nèi)手足口病感染的優(yōu)勢病原體之一。CA10共分為A～G的7個基因型。目前國內(nèi)外大多通過與周邊地區(qū)或其他國家的流行株進(jìn)行核苷酸和氨基酸的同源性對比，來分析CA10的流行情況。在我國，CA10近年來在多地區(qū)流行的病毒株保持著較高的同源性，與其他國家的分離株之間的同源性距離較遠(yuǎn)，具有地域分布特點以及一定的時間分布特點。CA10傳染性強、隱性感染比例大、傳播途徑復(fù)雜、傳播速度快，在短時間內(nèi)可造成較大范圍的流行，疫情控制難度大。 CA10病毒主要通過糞口途徑傳播，主要經(jīng)胃腸道進(jìn)入機體內(nèi)。病毒在入侵的局部上皮細(xì)胞中完成增殖，然后病毒侵入局部淋巴組織中繼續(xù)增殖并釋放入血導(dǎo)致第一次病毒血癥。病毒隨血液傳播接觸到正常靶細(xì)胞。病毒表面的VP1蛋白與靶細(xì)胞表面特異性受體結(jié)合，完成吸附過程，其基因組RNA進(jìn)入胞質(zhì)。之后，病毒以其正鏈RNA作為模板，合成互補的負(fù)鏈RNA，又以負(fù)鏈RNA為模板合成病毒正鏈RNA，從而得到大量病毒RNA，進(jìn)入子代病毒顆粒組裝階段。通過轉(zhuǎn)錄、翻譯，復(fù)制出二代病毒，再次釋放入血形成第二次病毒血癥并引起臨床癥狀。目前有大量研究表明，手足口病患兒的細(xì)胞免疫出現(xiàn)紊亂，并且這種免疫紊亂在重癥與死亡病例中表現(xiàn)得更加嚴(yán)重。肺水腫被認(rèn)為是感染的患兒中是最為嚴(yán)重的并發(fā)癥之一，腦干的損傷則被認(rèn)為是導(dǎo)致肺水腫的重要因素。很多研究表明參與細(xì)胞免疫的諸多炎性因子，例如IL-1、IL-6、IL-10、IL-13、IFN-γ、TNF-α的增加、T細(xì)胞亞群CD3+CD4+，以及自然殺傷細(xì)胞（NK）等，與肺水腫的發(fā)生具有相關(guān)性。 CA10易感染5歲以下年齡的幼兒，潛伏期多為2-10天。CA10感染兒童多引起輕型手足口病，患兒往往無明顯的早期癥狀，大多數(shù)病人預(yù)后良好。臨床上，往往表現(xiàn)為多發(fā)的斑丘疹和（或）皰疹，最多見于手足口、臂及膝關(guān)節(jié)。典型皰疹通常突出皮膚表面，呈現(xiàn)黃豆粒大小，圓形或橢圓形，其內(nèi)液體混濁，常無疼痛和瘙癢感，約1周時間皰疹可自行消退，通常不留疤痕。病人或伴有發(fā)熱、流涕、咳嗽、食欲不振、惡心、嘔吐或腹瀉等癥狀，一般能自愈，無后遺癥。但少數(shù)兒童感染CA10后出現(xiàn)嚴(yán)重并發(fā)癥，如腦膜炎、腦炎、急性弛緩性麻痹和神經(jīng)呼吸綜合征等。隨著CA10流行程度的增加、重癥病例的出現(xiàn)，開發(fā)針對性的抗病毒藥物和疫苗成為當(dāng)務(wù)之急，而建立穩(wěn)定的CA10感染動物模型不僅是開發(fā)藥物和疫苗的關(guān)鍵點之一，也為研究病毒的感染機制和機體免疫反應(yīng)提供研究基礎(chǔ)。 |
| 實驗動物背景信息 |
ICR小鼠毛色白化。適應(yīng)性強，體格健壯，繁殖力強，生長速度快，實驗重復(fù)性較好，雌鼠自發(fā)性畸胎瘤和管狀腺瘤發(fā)病率為0%-1%，用氨基甲酸乙酯誘發(fā)時，11-16天胚胎期畸胎瘤和管狀腺瘤發(fā)病率為5.9%，離乳個體管狀腺瘤和囊瘤發(fā)生率為30%,孕鼠為3%。是國際通用的封閉群小鼠。外周血項和骨髓細(xì)胞，具有較好的穩(wěn)定性，是良好的血液學(xué)實驗用動物。是進(jìn)行手足口病原研究的理想動物。 |
| 模型制作方法 |
1.病毒準(zhǔn)備：CA10病毒(GenBank: MF688814.1)，由醫(yī)院咽拭子分離得到，在人橫紋肌瘤細(xì)胞（RD）中培養(yǎng)、擴增，并采用反復(fù)凍融法釋放病毒，離心富集病毒。具體操作如下：
RD細(xì)胞經(jīng)常規(guī)傳代培養(yǎng)接種到T75細(xì)胞培養(yǎng)瓶，感染前棄去原培養(yǎng)基，細(xì)胞用含2%雙抗的PBS 洗2遍，吸出PBS后加入無血清DMEM培養(yǎng)基。接種適量的CA10病毒后，置37℃ 5% CO2培養(yǎng)箱孵育1-2h；加入完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。接種病毒后2-3d病變CPE達(dá)到+++～++++，將T75細(xì)胞瓶置封口袋中，-80℃超低溫冰箱凍化3次。然后將培養(yǎng)液轉(zhuǎn)移至50mL離心管中，4℃，2000rpm離心20min，沉淀細(xì)胞碎片。吸取病毒上清，分裝后凍存，并測定病毒滴度TICD50。 |
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