C57BL/6小鼠

1 實(shí)驗(yàn)材料

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物  選擇健康雄性C57小鼠小鼠，體質(zhì)量18-22 g，均購(gòu)于北京華阜康華生物科技股份有限公司。飼養(yǎng)于中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所動(dòng)物中心動(dòng)物房?jī)?nèi)，5只/盒屏障系統(tǒng)中，溫度( 22±2) ℃，濕度50%～60%，12 h 循環(huán)照明，小鼠自由攝取食、水，IACUC號(hào)：ILAS-YZW17007。

2 方法

2.1 動(dòng)物模型制備

C57小鼠根據(jù)體重，三溴乙醇麻醉0.18ml/10g體重，（360mg/kg體重）（三溴乙醇儲(chǔ)存液：25g三溴乙醇+15.5ml叔戊醇，使用液：0.50ml儲(chǔ)存液+39.5ml生理鹽水），俯臥位固定于加熱墊上保持體溫，背部頸部脫毛膏脫毛，酒精消毒處理，無(wú)菌手術(shù)剪剪開(kāi)后背頸部皮膚，用鑷子將皮下探查出一個(gè)可以足夠裝下藥品的空間，將DOCA 緩釋泵塞入皮下，鑷子將該處皮膚對(duì)齊復(fù)合，無(wú)菌縫合線(xiàn)縫合皮膚，放置在加熱板上保暖，待蘇醒后放回鼠盒，手術(shù)后用止痛果凍緩解疼痛。

2.2 標(biāo)本采集及處理  

完成DOCA+高鹽干預(yù)21天后，稱(chēng)體重，麻醉后腹主動(dòng)脈采血至死亡，室溫靜置2h后于4℃ 3000r離心10分鐘提取血清，-80℃冰箱凍存。取心臟、主動(dòng)脈做石蠟切片，10%中性福爾馬林中固定，30%蔗糖脫水，冰凍切片包埋劑包埋并切片；進(jìn)行免疫組化及免疫熒光檢測(cè)，其余血管組織液氮冷凍-80℃保存，提取蛋白進(jìn)行免疫印跡檢測(cè)。