一、檢測(cè)目的與標(biāo)準(zhǔn)

1. 核心目標(biāo)
   • 定量或定性檢測(cè)樣品中的吲哚（Indole），常見(jiàn)于微生物鑒定（如大腸桿菌）、尿液分析、環(huán)境污染物檢測(cè)及化工產(chǎn)品質(zhì)控。
   • 符合標(biāo)準(zhǔn)：
     • 微生物鑒定：CLSI M35-A（臨床微生物鑒定標(biāo)準(zhǔn)）、ISO 21528-2（腸桿菌科檢測(cè)）。
     • 化學(xué)分析：GB/T 5750.8-2006（生活飲用水檢驗(yàn)方法）、EPA 8310（高效液相色譜法）。
     • 醫(yī)學(xué)檢測(cè)：WS/T 402-2012（尿液化學(xué)分析）。

二、常見(jiàn)檢測(cè)方法

1. 微生物吲哚試驗(yàn)（定性）

原理：細(xì)菌分解色氨酸生成吲哚，與試劑反應(yīng)顯色。 試劑：Kovac試劑（對(duì)二甲氨基苯甲醛+戊醇+濃鹽酸）。 步驟：

1. 接種細(xì)菌于色氨酸肉湯，37℃培養(yǎng)18-24小時(shí)。
2. 加入0.5mL Kovac試劑，靜置1分鐘。
3. 結(jié)果判讀：液面出現(xiàn)玫瑰紅色環(huán)為陽(yáng)性（+），無(wú)顯色為陰性（-）。

2. 分光光度法（定量）

原理：吲哚與特定試劑顯色后，在特定波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度。 試劑：

• Ehrlich試劑：1%對(duì)二甲氨基苯甲醛（溶于10%鹽酸+乙醇）。
• 標(biāo)準(zhǔn)品：吲哚標(biāo)準(zhǔn)溶液（梯度濃度：0-50mg/L）。

步驟：

1. 樣品處理：液體樣品離心過(guò)濾，固體樣品用甲醇/水提取。
2. 顯色反應(yīng)：取1mL樣品+1mL Ehrlich試劑，避光反應(yīng)10分鐘。
3. 測(cè)定：于560nm測(cè)吸光度，對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算濃度。

3. 高效液相色譜法（HPLC）

條件：

• 色譜柱：C18柱（5μm，4.6×250mm）。
• 流動(dòng)相：甲醇:水（70:30，含0.1%甲酸）。
• 流速：1.0mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)：280nm。

步驟：

1. 樣品前處理：水樣過(guò)0.22μm濾膜，尿樣稀釋10倍后進(jìn)樣。
2. 標(biāo)準(zhǔn)曲線：0-100mg/L吲哚標(biāo)準(zhǔn)品，線性R²≥0.999。
3. 定量：外標(biāo)法計(jì)算樣品濃度，保留時(shí)間約6.5分鐘。

三、檢測(cè)流程與操作規(guī)范

1. 微生物檢測(cè)（示例：大腸桿菌吲哚試驗(yàn)）

• 培養(yǎng)基：胰蛋白胨水（含1%色氨酸），滅菌后接種菌株。
• 培養(yǎng)條件：37℃±1℃，需氧培養(yǎng)18-24小時(shí)。
• 關(guān)鍵控制點(diǎn)：
  • 試劑現(xiàn)配現(xiàn)用（Kovac試劑避光保存≤1周）。
  • 陰性對(duì)照：接種無(wú)菌肉湯；陽(yáng)性對(duì)照：已知產(chǎn)吲哚菌株。

2. 尿液吲哚檢測(cè)（醫(yī)學(xué)應(yīng)用）

• 樣本收集：晨尿10mL，2小時(shí)內(nèi)檢測(cè)或4℃保存≤24小時(shí)。
• 快速試紙法：
  1. 浸漬試紙條于尿液中2秒。
  2. 30秒后對(duì)比色卡，紫色為陽(yáng)性（提示腸道代謝異?；蚋腥荆?/li>

四、質(zhì)量控制要點(diǎn)

1. 標(biāo)準(zhǔn)品校準(zhǔn)：每批次檢測(cè)需建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，驗(yàn)證線性范圍。
2. 空白對(duì)照：試劑空白吸光度≤0.02（分光光度法）。
3. 精密度：重復(fù)檢測(cè)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）≤5%。
4. 回收率試驗(yàn)：加標(biāo)回收率85-115%（HPLC法）。

五、常見(jiàn)問(wèn)題與解決方案

六、安全與注意事項(xiàng)

• 試劑毒性：Kovac試劑含濃鹽酸，操作時(shí)佩戴手套、護(hù)目鏡。
• 廢棄物處理：顯色后廢液按有害化學(xué)廢物處理。
• 儀器維護(hù)：HPLC使用后沖洗色譜柱30分鐘（甲醇:水=50:50）。

通過(guò)規(guī)范操作與質(zhì)量控制，吲哚檢測(cè)可準(zhǔn)確應(yīng)用于微生物鑒定、臨床診斷及環(huán)境監(jiān)測(cè)，為多領(lǐng)域提供可靠數(shù)據(jù)支持。

檢測(cè)機(jī)構(gòu)資質(zhì)證書

CMA認(rèn)證

檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)資質(zhì)認(rèn)定證書

證書編號(hào)：241520345370

有效期至：2030年4月15日

CNAS認(rèn)可

實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可證書

證書編號(hào)：CNAS L22006

有效期至：2030年12月1日

ISO認(rèn)證

質(zhì)量管理體系認(rèn)證證書

證書編號(hào)：ISO9001-2024001

有效期至：2027年12月31日

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