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糞大腸菌群檢測(cè)

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發(fā)布時(shí)間：2025-03-13 14:24:15 更新時(shí)間：2025-03-12 14:24:36

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作者：中科光析科學(xué)技術(shù)研究所檢測(cè)中心

糞大腸菌群（Fecal Coliforms）是評(píng)估水體、食品及環(huán)境樣品受糞便污染的關(guān)鍵衛(wèi)生指標(biāo)，其檢測(cè)需遵循 GB/T 5750.12-2023（生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法）、ISO 9308-1（水質(zhì)檢測(cè)） 及 FDA BAM（細(xì)菌學(xué)分析手冊(cè)） 等標(biāo)準(zhǔn)。以下是系統(tǒng)化檢測(cè)方案：

一、檢測(cè)原理與意義

定義：
- 糞大腸菌群為能在 44.5℃ 發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣的需氧/兼性厭氧革蘭氏陰性無(wú)芽孢桿菌，包括 大腸埃希氏菌（E. coli） 及部分克雷伯氏菌屬。
應(yīng)用場(chǎng)景：
- 水質(zhì)監(jiān)測(cè)：判定飲用水、地表水是否受糞便污染；
- 食品衛(wèi)生：檢測(cè)生鮮食品（乳制品、肉類）加工衛(wèi)生狀況；
- 醫(yī)療/環(huán)保：評(píng)估污水排放、醫(yī)院環(huán)境消毒效果。

二、核心檢測(cè)方法對(duì)比

方法	原理	適用樣本	檢出限	標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)
多管發(fā)酵法	乳糖發(fā)酵產(chǎn)氣（44.5℃培養(yǎng)）→EC肉湯確證	飲用水、污水	2 MPN/100mL	GB/T 5750.12-2023
濾膜法	樣品過(guò)濾→MF-Endo培養(yǎng)基培養(yǎng)→計(jì)數(shù)菌落	低濁度水（<200 NTU）	1 CFU/100mL	ISO 9308-1:2014
酶底物法	β-葡萄糖醛酸酶（E. coli特異性）顯色反應(yīng)	快速篩查（水/食品）	1 CFU/100mL	EPA 1603（美國(guó)）
實(shí)時(shí)熒光PCR	檢測(cè)uidA基因（E. coli特異性）	高靈敏度快速檢測(cè)	10 copies/mL	ISO/TS 13136:2012

三、多管發(fā)酵法操作流程（GB/T 5750.12-2023）

1. 樣品采集與預(yù)處理

采樣容器：無(wú)菌玻璃瓶（含硫代硫酸鈉中和余氯）；
保存條件：4℃冷藏，24h內(nèi)檢測(cè)；
稀釋梯度：根據(jù)預(yù)期污染程度選擇（如原液、10?¹、10?²）。

2. 初發(fā)酵試驗(yàn)

接種：
- 取10mL水樣接種至10mL雙倍乳糖蛋白胨培養(yǎng)液（含溴甲酚紫指示劑）；
- 設(shè)置3個(gè)梯度（10mL×3管、1mL×3管、0.1mL×3管）。
培養(yǎng)：44.5℃±0.5℃水浴培養(yǎng)24h±2h，觀察產(chǎn)酸（變黃）產(chǎn)氣（杜氏管氣泡）。

3. 確證試驗(yàn)（EC肉湯）

轉(zhuǎn)種：初發(fā)酵陽(yáng)性管（產(chǎn)酸產(chǎn)氣）轉(zhuǎn)種至EC肉湯；
培養(yǎng)：44.5℃培養(yǎng)24h，記錄產(chǎn)氣管數(shù)；
MPN計(jì)算：根據(jù)陽(yáng)性管組合查MPN表（如3-2-1對(duì)應(yīng)14 MPN/100mL）。

四、濾膜法操作要點(diǎn)（ISO 9308-1）

過(guò)濾：
- 使用0.45μm孔徑濾膜，過(guò)濾100mL水樣；
培養(yǎng)：
- 濾膜貼于MF-Endo培養(yǎng)基，44.5℃培養(yǎng)24h；
計(jì)數(shù)：
- 典型菌落（金屬光澤綠斑）計(jì)數(shù)，結(jié)果報(bào)告為CFU/100mL。

五、關(guān)鍵設(shè)備與試劑

設(shè)備/試劑	用途	推薦型號(hào)/品牌
恒溫水浴箱	44.5℃±0.5℃精確控溫（多管發(fā)酵法）	Memmert WNB14（±0.1℃精度）
濾膜過(guò)濾系統(tǒng)	微生物過(guò)濾（47mm濾膜）	Millipore Stericup®（無(wú)菌預(yù)裝）
熒光PCR儀	E. coli基因快速檢測(cè)	Bio-Rad CFX96 Touch™
EC肉湯	糞大腸菌群選擇性增菌	青島海博生物（符合GB標(biāo)準(zhǔn)）
MF-Endo培養(yǎng)基	濾膜法顯色培養(yǎng)（金屬光澤菌落）	Merck 1.14654.0500

六、結(jié)果判定與標(biāo)準(zhǔn)限值

樣本類型	限值標(biāo)準(zhǔn)	法規(guī)依據(jù)
飲用水	不得檢出（MPN=0/100mL）	GB 5749-2022（生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)）
地表水（Ⅲ類）	≤2000 MPN/L（GB 3838-2002）	地表水環(huán)境質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
食品（巴氏奶）	≤1 CFU/mL（GB 19645-2010）	食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)
污水排放	≤1000 MPN/L（GB 18918-2002一級(jí)A）	城鎮(zhèn)污水處理廠污染物排放標(biāo)準(zhǔn)

七、常見(jiàn)問(wèn)題與解決方案

問(wèn)題現(xiàn)象	可能原因	優(yōu)化措施
假陽(yáng)性（非目標(biāo)菌產(chǎn)氣）	克雷伯氏菌等干擾菌存在	確證試驗(yàn)改用EC肉湯（抑制非糞大腸菌群）
濾膜法菌落不典型	水中懸浮物干擾或培養(yǎng)溫度波動(dòng)	預(yù)過(guò)濾（5μm濾膜）或校準(zhǔn)培養(yǎng)箱溫度（±0.2℃）
PCR抑制（食品樣本）	樣本含腐殖酸/脂肪抑制DNA擴(kuò)增	優(yōu)化DNA提?。ù胖榉ǎ?+ 添加BSA/PVP
MPN結(jié)果偏差大	稀釋梯度設(shè)置不當(dāng)或產(chǎn)氣管分布不均	按污染程度預(yù)實(shí)驗(yàn)選擇合理稀釋梯度

八、報(bào)告與認(rèn)證要求

報(bào)告內(nèi)容：
- 樣品信息（類型、采集時(shí)間/地點(diǎn)）、檢測(cè)方法、稀釋梯度、MPN/CFU值；
- 結(jié)論（是否符合相關(guān)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)）。
認(rèn)證資質(zhì)：
- 國(guó)內(nèi)：CMA/CNAS認(rèn)證實(shí)驗(yàn)室；
- 國(guó)際：ISO/IEC 17025認(rèn)可，或EPA認(rèn)證（美國(guó)市場(chǎng)）。

通過(guò)系統(tǒng)化檢測(cè)，可精準(zhǔn)評(píng)估樣本衛(wèi)生狀況，指導(dǎo)污染防控。建議對(duì)高風(fēng)險(xiǎn)區(qū)域（如醫(yī)院污水）采用 快速檢測(cè)技術(shù)（如酶底物法） 實(shí)時(shí)監(jiān)控，并結(jié)合 溯源分析（PFGE或MLST分型） 追蹤污染源頭。對(duì)于食品企業(yè)，應(yīng)加強(qiáng) 加工環(huán)節(jié)衛(wèi)生控制（HACCP） 以降低糞大腸菌群污染風(fēng)險(xiǎn)。