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免疫共沉淀(Co-IP蛋白與蛋白)

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發(fā)布時(shí)間：2024-05-21 08:15:32 更新時(shí)間：2025-02-18 14:34:20

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　　免疫共沉淀(Co-IP蛋白與蛋白)

　　(1)相互作用的蛋白質(zhì)都是經(jīng)翻譯后修飾的，處于天然狀態(tài);(2)蛋白的相互作用是在自然狀態(tài)下進(jìn)行的，可以避免人為的影響;(3)可以分離得到天然狀態(tài)的相互作用蛋白復(fù)合物。免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎(chǔ)的用于研究蛋白質(zhì)相互作用

的經(jīng)典方法。是確定兩種蛋白質(zhì)在完整細(xì)胞內(nèi)生理性相互作用的有效方法。其原理是：當(dāng)細(xì)胞在非變性條件下被裂解時(shí)，完整細(xì)胞內(nèi)存在的許多蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)間的相互作用被保留了下來。如果用蛋白質(zhì)X的抗體免疫沉淀X，那么與X在體內(nèi)結(jié)合的蛋白質(zhì)Y也能沉淀下來。目前多用精制的prorein A預(yù)先結(jié)合固化在argarose的beads上，使之與含有抗原的溶液及抗體反應(yīng)后，beads上的prorein A就能吸附抗原達(dá)到精制的目的。這種方法常用于測定兩種目標(biāo)蛋白質(zhì)是否在體內(nèi)結(jié)合，也可用于確定一種特定蛋白質(zhì)的新的作用搭檔。

Co-IP的原理與免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)大致相似，都由特異抗體與待檢樣品中相應(yīng)的特異抗原結(jié)合形成抗原一抗體免疫復(fù)合物，然后復(fù)合物吸附于固化了蛋白A或G的支持物上(蛋白A或G具有吸附抗體的能力)，相應(yīng)的抗原分子也同時(shí)被吸附。免疫復(fù)合物被吸附到支持物上的過程即為沉淀(Precipitation)。沒有被沉淀的蛋白質(zhì)隨著緩沖液的流洗而被除去。但在免疫共沉淀中，與靶抗原一起被沉淀的還有靶抗原的相互作用蛋白質(zhì)，即隨著抗體被吸附于固化了蛋白A或G的支持物上，相應(yīng)的抗原及其相互作用蛋白質(zhì)也同時(shí)被沉淀。最后，采用相互作用蛋白質(zhì)的特異抗體經(jīng)Western Blot檢測，以證實(shí)二者存在相互作用。