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CHO細胞蛋白質(zhì)殘留量檢測

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發(fā)布時間：2025-08-02 21:29:47 更新時間：2025-08-01 21:29:47

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作者：中科光析科學(xué)技術(shù)研究所檢測中心

CHO細胞蛋白質(zhì)殘留量檢測

中國倉鼠卵巢細胞（Chinese Hamster Ovary cells, CHO cells）是生物制藥領(lǐng)域中最常用的宿主細胞之一，廣泛應(yīng)用于重組蛋白藥物的生產(chǎn)，如單克隆抗體、疫苗和酶制劑等。在藥物生產(chǎn)過程中，殘留的宿主細胞蛋白（Host Cell Proteins, HCPs）是一個關(guān)鍵的質(zhì)量控制點。這些殘留蛋白可能來源于細胞裂解或純化步驟中的不完全去除，如果含量過高，可能引發(fā)患者免疫反應(yīng)、過敏或降低藥物療效，從而危及用藥安全。因此，嚴格監(jiān)測CHO細胞蛋白質(zhì)殘留量對于確保生物制品的安全性、有效性和合規(guī)性至關(guān)重要。這不僅符合國際藥品監(jiān)管機構(gòu)（如FDA、EMA）的嚴格規(guī)范，如ICH Q6B指南，還涉及GMP（藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范）的要求。檢測過程需要在藥物開發(fā)的各個階段實施，包括上游培養(yǎng)、下游純化和最終產(chǎn)品放行，以避免批次失敗和召回風(fēng)險。

檢測項目

CHO細胞蛋白質(zhì)殘留量檢測的核心項目是宿主細胞蛋白（HCPs）的總殘留量測定。這包括定量分析樣品中殘留的CHO細胞源性蛋白的總濃度，通常以百萬分率（ppm）或納克/毫克（ng/mg）表示。此外，特定檢測項目可能涉及高豐度或高免疫原性的個體蛋白殘留，如蛋白酶或細胞因子，這些在特定藥物中可能更具風(fēng)險。檢測還可能包括雜質(zhì)譜分析，以識別殘留蛋白的類型和來源，確保它們不超過可接受限值（Acceptable Limit）。項目設(shè)計需基于藥物類型、生產(chǎn)工藝和患者人群的敏感性，例如在單克隆抗體生產(chǎn)中，HCP殘留常被控制在低于100 ppm的水平。

檢測儀器

用于CHO細胞蛋白質(zhì)殘留量檢測的儀器主要包括高靈敏度和特異性的分析設(shè)備。最常用的是酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測儀，它能自動化讀取和定量HCP抗體結(jié)合的信號，靈敏度可達納克級別。此外，高效液相色譜儀（HPLC）用于分離和定量蛋白混合物，特別適用于雜質(zhì)譜分析；質(zhì)譜儀（如LC-MS/MS）則提供高分辨率檢測，能識別單個殘留蛋白的序列和豐度。其他輔助儀器包括免疫印跡系統(tǒng)（如Western blot設(shè)備）、微孔板分光光度計和自動化移液工作站，以提高檢測效率和重現(xiàn)性。這些儀器需定期校準和維護，以確保數(shù)據(jù)準確性，并符合GLP（良好實驗室規(guī)范）要求。

檢測方法

CHO細胞蛋白質(zhì)殘留量的檢測方法多樣，其中酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）是行業(yè)標準方法。ELISA基于抗體-抗原特異性結(jié)合的原理，使用抗-CHO HCP抗體包被微孔板，加入樣品后通過酶標二抗產(chǎn)生顏色反應(yīng)，再以分光光度法量化殘留量。該方法靈敏度高（檢測限約1-10 ng/mL）、通量大，適用于常規(guī)批次檢測。另一種常用方法是Western blot，用于定性或半定量分析特異性殘留蛋白。對于高精度需求，液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（LC-MS/MS）方法可提供絕對定量和蛋白鑒定。所有方法均需優(yōu)化樣品前處理（如緩沖液稀釋、離心去雜質(zhì)）和驗證參數(shù)（如線性范圍、精密度和回收率），以確保結(jié)果可靠。新興方法如基于質(zhì)譜的多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）正逐步應(yīng)用于復(fù)雜樣品。

檢測標準

CHO細胞蛋白質(zhì)殘留量檢測的標準嚴格遵循國際和國家級法規(guī)指南。核心標準包括ICH Q6B（生物技術(shù)產(chǎn)品質(zhì)量要求），它規(guī)定殘留量需基于風(fēng)險評估設(shè)定限值，通常HCP總量不超過100 ppm或更低。美國藥典（USP）<1132>章節(jié)和歐洲藥典（EP）2.6.34提供了方法驗證和接受標準的具體要求，如檢測的精密度應(yīng)≤20% RSD（相對標準偏差）。此外，標準要求使用經(jīng)過驗證的試劑，如商業(yè)化抗-CHO HCP抗體試劑盒，并執(zhí)行嚴格的QC（質(zhì)量控制）測試，包括陰性/陽性對照和標準曲線校準。企業(yè)還需建立內(nèi)部SOP（標準操作程序），確保檢測全過程可追溯和符合GMP/GLP。持續(xù)監(jiān)測和趨勢分析是標準執(zhí)行的關(guān)鍵部分，以應(yīng)對生產(chǎn)工藝變更帶來的風(fēng)險。