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手表面的菌落總數(shù)檢測(cè)

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發(fā)布時(shí)間：2025-08-02 10:22:05 更新時(shí)間：2025-08-01 10:22:05

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作者：中科光析科學(xué)技術(shù)研究所檢測(cè)中心

手表面菌落總數(shù)檢測(cè)：保障衛(wèi)生安全的關(guān)鍵環(huán)節(jié)

手作為人體直接接觸外界環(huán)境的主要部位，是微生物傳播的重要媒介。在醫(yī)療、食品加工、制藥、實(shí)驗(yàn)室操作以及餐飲服務(wù)等眾多對(duì)衛(wèi)生要求極為嚴(yán)格的領(lǐng)域，手部衛(wèi)生狀況直接關(guān)系到交叉污染的風(fēng)險(xiǎn)、產(chǎn)品質(zhì)量安全以及公共健康。因此，定期、規(guī)范地檢測(cè)手表面的菌落總數(shù)（Total Viable Count, TVC），成為評(píng)估手部清潔消毒效果、監(jiān)控衛(wèi)生操作規(guī)范執(zhí)行情況、預(yù)防感染和污染不可或缺的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。菌落總數(shù)檢測(cè)反映了樣品中需氧和兼性厭氧的異養(yǎng)細(xì)菌、酵母菌和霉菌在適宜條件下（如特定培養(yǎng)基、溫度、時(shí)間）生長(zhǎng)繁殖形成肉眼可見(jiàn)菌落的數(shù)量，是評(píng)價(jià)物體（此處為手部皮膚）受微生物污染程度的重要衛(wèi)生指標(biāo)。通過(guò)科學(xué)的檢測(cè)流程，能夠及時(shí)發(fā)現(xiàn)潛在風(fēng)險(xiǎn)，指導(dǎo)改進(jìn)手部清潔消毒程序，有效阻斷微生物傳播鏈。

檢測(cè)項(xiàng)目

本檢測(cè)的核心項(xiàng)目是：手表面菌落總數(shù) (Total Viable Count on Hand Surface)。具體而言，是通過(guò)規(guī)范的采樣和培養(yǎng)計(jì)數(shù)方法，測(cè)定工作人員（或受試者）在特定時(shí)間點(diǎn)（如工作前、關(guān)鍵操作前、操作后、手部清潔消毒后等）單只手掌（通常包括手指、指縫、掌心和手背）或雙手指定區(qū)域表面殘留的可培養(yǎng)微生物總量。其結(jié)果以菌落形成單位每只手（或每平方厘米）(CFU/hand 或 CFU/cm2)來(lái)表示。

檢測(cè)儀器與主要耗材

進(jìn)行手表面菌落總數(shù)檢測(cè)，通常需要以下核心儀器設(shè)備和耗材：

無(wú)菌采樣工具：
- 無(wú)菌棉拭子（Swab）與采樣液： 常用于涂抹法。拭子頭通常由合成纖維（如滌綸）制成，采樣液為無(wú)菌緩沖液（如磷酸鹽緩沖液PBS）或含中和劑的溶液（如含卵磷脂、聚山梨酯-80以中和殘留消毒劑）。
- 無(wú)菌接觸皿（Contact Plate或RODAC Plate）： 適用于按壓法（直接印跡法）。瓊脂表面凸起，便于與手部曲面充分接觸。內(nèi)含標(biāo)準(zhǔn)平板計(jì)數(shù)瓊脂（PCA）或胰蛋白胨大豆瓊脂（TSA），常添加中和劑。
培養(yǎng)設(shè)備：
- 恒溫培養(yǎng)箱： 用于在特定溫度（通常為30-35°C或36±1°C）下培養(yǎng)微生物。
微生物實(shí)驗(yàn)室基礎(chǔ)設(shè)備：
- 無(wú)菌操作臺(tái)/生物安全柜： 提供無(wú)菌環(huán)境，用于樣品處理、傾注平板等操作，防止污染。
- 均質(zhì)器/漩渦混合器： 用于將棉拭子采樣液中的微生物充分洗脫、混勻（若后續(xù)采用傾注法）。
- 微量移液器及無(wú)菌吸頭： 用于精確移取液體樣品。
- 無(wú)菌培養(yǎng)皿： 用于傾注法。
- 菌落計(jì)數(shù)器： 手動(dòng)或自動(dòng)設(shè)備，用于準(zhǔn)確計(jì)數(shù)培養(yǎng)后平板上的菌落數(shù)。
培養(yǎng)基：
- 平板計(jì)數(shù)瓊脂（Plate Count Agar, PCA）或胰蛋白胨大豆瓊脂（Tryptone Soya Agar, TSA）： 最常用的非選擇性培養(yǎng)基，用于菌落總數(shù)的培養(yǎng)計(jì)數(shù)。
- 含中和劑的培養(yǎng)基： 若懷疑手部有消毒劑殘留，培養(yǎng)基中需預(yù)先加入合適的中和劑（如卵磷脂、吐溫-80、硫代硫酸鈉等）。
其他耗材： 無(wú)菌手套、酒精燈、記號(hào)筆、記錄本等。

檢測(cè)方法

手表面菌落總數(shù)檢測(cè)主要有兩種常用方法，均需嚴(yán)格遵循無(wú)菌操作原則：

涂抹法 (Swab Rinse Method)：
- 采樣人員佩戴無(wú)菌手套。
- 取一支無(wú)菌棉拭子，蘸取適量無(wú)菌采樣液（通常為含中和劑的緩沖液）。
- 規(guī)范涂抹：用棉拭子用力、全面、有規(guī)律地（如沿手指長(zhǎng)度方向、橫向、旋轉(zhuǎn)）涂抹受檢者單只手的整個(gè)表面（包括指間、指尖、掌心、掌背、手腕前部等），確保所有預(yù)定區(qū)域都被涂抹到。
- 將涂抹后的棉拭子頭剪入或直接放入盛有定量（如10ml）無(wú)菌采樣液（含中和劑）的試管中。也可以將拭子放入含采樣液的試管內(nèi)，充分振蕩洗脫。
- 在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，對(duì)洗脫液進(jìn)行適當(dāng)稀釋（根據(jù)預(yù)期污染程度）。
- 傾注法培養(yǎng)： 取1ml稀釋液（或原液）加入無(wú)菌培養(yǎng)皿，傾注約15-20ml融化并冷卻至約45°C的PCA或TSA瓊脂，立即混勻。凝固后倒置培養(yǎng)。
- 涂布法培養(yǎng)： 取0.1ml稀釋液（或原液）滴加到已凝固的瓊脂平板表面，用無(wú)菌涂布棒均勻涂開(kāi)。待吸收后倒置培養(yǎng)。
按壓法/直接印跡法/接觸皿法 (Contact Plate Method/RODAC Plate Method)：
- 采樣人員佩戴無(wú)菌手套，取出無(wú)菌接觸皿（內(nèi)含帶中和劑的瓊脂，表面凸起）。
- 受檢者將手（通常為優(yōu)勢(shì)手）五指稍分開(kāi)，手掌向下。
- 將接觸皿的瓊脂表面均勻、平穩(wěn)、有力地按壓在手的整個(gè)表面（指尖到腕部），確保瓊脂與皮膚充分接觸，按壓時(shí)間通常為幾秒鐘。施加的壓力需均勻、一致（通常規(guī)定如1kg左右）。
- 立即蓋上皿蓋，標(biāo)記清晰。
- 倒置，放入恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
培養(yǎng)與計(jì)數(shù)：
- 將平板倒置于恒溫培養(yǎng)箱中，在規(guī)定的溫度（如30-35°C或36±1°C）下培養(yǎng)規(guī)定的時(shí)間（通常為48±2小時(shí)或72±2小時(shí)）。
- 培養(yǎng)結(jié)束后，取出平板進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。選擇菌落數(shù)在30-300 CFU之間的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)（低于30則記錄實(shí)際數(shù)，視為估計(jì)值；高于300則記錄為“多不可計(jì)”TMTC，并選擇較高稀釋度的平板）。
- 對(duì)于接觸皿法，直接計(jì)數(shù)瓊脂表面的菌落數(shù)。
- 對(duì)于涂抹法傾注或涂布平板，計(jì)算出每毫升洗脫液中的菌落數(shù)（CFU/ml），再根據(jù)洗脫液總體積（如10ml）和涂抹的手部面積（通常成年人單手面積按30 cm2估算，或按實(shí)際測(cè)量），最終計(jì)算出結(jié)果（CFU/手或 CFU/cm2）。公式示例（涂抹法）：
  菌落總數(shù) (CFU/手) = 平均菌落數(shù) × 稀釋倍數(shù) × 洗脫液總體積(ml) / 取樣體積(ml)
  或菌落總數(shù) (CFU/cm2) = [平均菌落數(shù) × 稀釋倍數(shù) × 洗脫液總體積(ml) / 取樣體積(ml)] / 手部采樣面積(cm2)