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分離血漿血紅蛋白含量檢測

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發(fā)布時(shí)間：2025-08-02 03:43:21 更新時(shí)間：2025-08-01 03:43:22

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作者：中科光析科學(xué)技術(shù)研究所檢測中心

分離血漿血紅蛋白含量檢測：臨床診斷與監(jiān)測的關(guān)鍵指標(biāo)

分離血漿血紅蛋白含量檢測是臨床實(shí)驗(yàn)室中至關(guān)重要的檢驗(yàn)項(xiàng)目，主要用于評(píng)估患者血液中游離血紅蛋白的濃度。在正常情況下，血紅蛋白主要存在于紅細(xì)胞內(nèi)，血漿中僅含微量。但當(dāng)發(fā)生溶血性疾病、輸血反應(yīng)、嚴(yán)重感染、燒傷或某些遺傳性疾?。ㄈ珀嚢l(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥）時(shí)，紅細(xì)胞大量破壞，導(dǎo)致血紅蛋白釋放入血漿，形成游離血紅蛋白。準(zhǔn)確檢測血漿中血紅蛋白的含量，對(duì)于早期診斷溶血、評(píng)估溶血嚴(yán)重程度、監(jiān)測治療效果以及指導(dǎo)輸血策略具有不可替代的臨床價(jià)值。它能幫助醫(yī)生及時(shí)識(shí)別血管內(nèi)溶血的發(fā)生，判斷腎功能受損風(fēng)險(xiǎn)（因血紅蛋白可堵塞腎小管），并在心臟手術(shù)、體外循環(huán)等有創(chuàng)操作中提供關(guān)鍵的血液損傷監(jiān)測數(shù)據(jù)。因此，建立標(biāo)準(zhǔn)化、精確的檢測流程至關(guān)重要。

檢測項(xiàng)目

本檢測項(xiàng)目的核心目標(biāo)是定量測定經(jīng)離心分離后獲得的血漿樣本中游離血紅蛋白（Hemoglobin, Hb）的濃度。檢測對(duì)象是游離于血漿中的血紅蛋白分子，而非紅細(xì)胞內(nèi)包含的血紅蛋白。其結(jié)果通常以毫克每分升（mg/dL）或毫克每升（mg/L）為單位進(jìn)行報(bào)告。該指標(biāo)直接反映了血管內(nèi)紅細(xì)胞破壞的程度和速度。

檢測儀器

分離血漿血紅蛋白含量的測定主要依賴以下精密儀器：

1. 分光光度計(jì)（Spectrophotometer）：這是最核心的檢測設(shè)備?；谘t蛋白及其衍生物對(duì)特定波長光的吸收特性（例如，氰化高鐵血紅蛋白在540nm處有最大吸收峰），通過測定樣本的吸光度值來計(jì)算血紅蛋白濃度?，F(xiàn)代的全自動(dòng)或半自動(dòng)分光光度計(jì)具有高精度和穩(wěn)定性。

2. 自動(dòng)化生化分析儀（Automated Chemistry Analyzer）：大型實(shí)驗(yàn)室普遍采用此類儀器。它們能自動(dòng)完成樣本分配、試劑添加、反應(yīng)孵育、吸光度測定和結(jié)果計(jì)算等步驟，具有高通量、快速和標(biāo)準(zhǔn)化程度高等優(yōu)勢，特別適用于批量樣本檢測。

3. 離心機(jī)（Centrifuge）：在檢測前用于分離血漿。必須使用具備精確轉(zhuǎn)速和時(shí)間控制能力的臨床離心機(jī)，以確保血漿與血細(xì)胞成分（尤其是殘余紅細(xì)胞）得到有效、徹底的分離，避免樣本溶血影響結(jié)果準(zhǔn)確性。

4. 微量加樣器（Micropipettes）：用于精確移取樣本、試劑和標(biāo)準(zhǔn)品，保證反應(yīng)體系體積的準(zhǔn)確性，這對(duì)計(jì)算結(jié)果的可靠性至關(guān)重要。

檢測方法

測定血漿游離血紅蛋白最常用且被廣泛認(rèn)可的標(biāo)準(zhǔn)方法是氰化高鐵血紅蛋白法（Hemoglobincyanide, HiCN 法）或其改良/替代方法：

1. 樣本采集與制備：嚴(yán)格規(guī)范采集靜脈血于含有抗凝劑（通常用EDTA-K2）的真空采血管中。輕柔混勻，避免劇烈震蕩導(dǎo)致人為溶血。盡快（通常在2小時(shí)內(nèi)）在適宜條件下（如3000 rpm，10分鐘）離心分離獲得無溶血的澄清血漿。這是獲得準(zhǔn)確結(jié)果的前提。

2. 氰化高鐵血紅蛋白法（HiCN法）原理與步驟： * 原理：血漿中的游離血紅蛋白在特定試劑（主要含鐵氰化鉀和氰化鉀）作用下，被氧化并轉(zhuǎn)化為穩(wěn)定的氰化高鐵血紅蛋白（HiCN）。HiCN在可見光波長540 nm處具有穩(wěn)定的、特定的最大吸收峰。 * 步驟： * 取一定體積的分離血漿加入工作試劑（如Drabkin's試劑或其改良配方）。 * 充分混勻，室溫避光靜置一段時(shí)間（通常10-15分鐘），確保反應(yīng)完全。 * 使用分光光度計(jì)在540 nm波長處測定樣本反應(yīng)液的吸光度（A_樣本）。 * 同時(shí)測定空白試劑（試劑+水）的吸光度（A_空白）和血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)品（已知濃度）的吸光度（A_{標(biāo)準(zhǔn)}）。 * 計(jì)算：血漿血紅蛋白濃度 (mg/dL) = [(A_樣本 - A_blank) / (A_{標(biāo)準(zhǔn)} - A_空白)] × 標(biāo)準(zhǔn)品濃度 (mg/dL) × 稀釋因子（如果樣本被稀釋）。

3. 替代方法：由于氰化物試劑的安全性問題，一些實(shí)驗(yàn)室采用替代方法，如： * 堿性血紅素法（堿羥高鐵血紅素法，AHD₅₇₅）：血紅蛋白在堿性條件下與特定試劑反應(yīng)形成在575 nm有吸收的產(chǎn)物。 * 十二烷基硫酸鈉血紅蛋白法（SDS-Hb）：利用SDS與血紅蛋白結(jié)合后在特定波長（如538 nm）測定。 * 基于過氧化物酶活性的方法：血紅蛋白具有過氧化物酶樣活性，可通過催化特定底物顯色反應(yīng)進(jìn)行間接測定。這些方法需與標(biāo)準(zhǔn)HiCN法進(jìn)行嚴(yán)格比對(duì)和校準(zhǔn)。

4. 自動(dòng)化方法：在自動(dòng)化生化分析儀上，原理與手工法相同，但儀器自動(dòng)完成加樣、混合、孵育、測光和計(jì)算全過程，提高了效率和精密度。具體程序需根據(jù)儀器和配套試劑盒的要求設(shè)置。

檢測標(biāo)準(zhǔn)

為確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性、可靠性和可比性，分離血漿血紅蛋白含量檢測必須遵循嚴(yán)格的國際和國內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)及規(guī)范：

1. 國際參考方法：國際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)（ICSH）推薦并詳細(xì)描述了氰化高鐵血紅蛋白（HiCN）測定法作為血紅蛋白測定的參考方法，其原理和操作規(guī)范是基準(zhǔn)。

2. 國際標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范：美國臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)（CLSI）發(fā)布的標(biāo)準(zhǔn)文件，如 CLSI H26-A2《游離血紅蛋白的定量測定》，提供了從樣本采集、處理、儲(chǔ)存、方法選擇、操作步驟到結(jié)果報(bào)告和質(zhì)量控制的全過程標(biāo)準(zhǔn)化指南。

3. 中國國家標(biāo)準(zhǔn)/行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)：中國衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)WS/T 344-2011《血紅蛋白測定參考方法》（雖然主要針對(duì)全血Hb，但原理適用于血漿游離Hb測定）以及相關(guān)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程，對(duì)實(shí)驗(yàn)環(huán)境、設(shè)備校準(zhǔn)、試劑要求、操作流程、質(zhì)量控制等做出了明確規(guī)定。

4. 核心質(zhì)量要求： * 樣本要求：嚴(yán)格避免溶血（采集、運(yùn)送、離心過程），及時(shí)分離血漿。分離后的血漿若不能立即檢測，需妥善保存（通常建議冷藏或冷凍，避免反復(fù)凍融）。 * 校準(zhǔn)：定期使用可溯源至國際標(biāo)準(zhǔn)的血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)儀器和方法進(jìn)行校準(zhǔn)。 * 質(zhì)量控制（QC）：每次檢測必須同時(shí)運(yùn)行至少兩個(gè)水平（正常值和病理值）的質(zhì)控品，結(jié)果應(yīng)在控方可報(bào)告患者結(jié)果。遵循Westgard多規(guī)則或類似規(guī)則進(jìn)行質(zhì)控判定。 * 性能驗(yàn)證：精密度（批內(nèi)、批間）、準(zhǔn)確度（比對(duì)、回收試驗(yàn)）、線性范圍、檢測限（LoD）、參考區(qū)間等關(guān)鍵性能指標(biāo)需定期驗(yàn)證并符合要求。 * 參考區(qū)間：健康成人血漿游離血紅蛋白濃度通常低于5 mg/dL (50 mg/L)。不同實(shí)驗(yàn)室應(yīng)基于本地人群和檢測方法確立或驗(yàn)證自己的參考區(qū)間。

嚴(yán)格遵循這些標(biāo)準(zhǔn)和方法，是保證分離血漿血紅蛋白含量檢測結(jié)果能夠有效服務(wù)于臨床診療決策的根本保障。