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非洲馬瘟瓊脂免疫擴(kuò)散試驗檢測

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發(fā)布時間：2025-05-14 04:02:44 更新時間：2025-05-13 04:02:44

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作者：中科光析科學(xué)技術(shù)研究所檢測中心

非洲馬瘟瓊脂免疫擴(kuò)散試驗檢測概述

非洲馬瘟（African Horse Sickness, AHS）是由非洲馬瘟病毒引起的一種急性或亞急性傳染病，主要感染馬科動物，傳播媒介為庫蠓等吸血昆蟲。該病具有高致死率且被世界動物衛(wèi)生組織（OIE）列為必須通報的動物疫病。瓊脂免疫擴(kuò)散試驗（Agar Gel Immunodiffusion Test, AGID）作為一種經(jīng)典的血清學(xué)檢測方法，被廣泛用于非洲馬瘟病毒抗體或抗原的檢測，具有操作簡便、成本低和特異性較高等特點，適用于實驗室和現(xiàn)場篩查。

檢測項目與目的

非洲馬瘟瓊脂免疫擴(kuò)散試驗主要檢測兩類目標(biāo)： 1. 抗原檢測：用于直接檢測樣本中非洲馬瘟病毒的存在，適用于發(fā)病早期或急性感染期的診斷。 2. 抗體檢測：通過檢測動物血清中的特異性抗體，評估感染后的免疫狀態(tài)或疫苗免疫效果。該試驗的核心目的是快速確診疫情、監(jiān)測群體免疫水平及支持國際貿(mào)易中的動物檢疫要求。

檢測儀器與試劑

進(jìn)行瓊脂免疫擴(kuò)散試驗需以下主要設(shè)備和試劑： - 儀器：瓊脂糖凝膠電泳儀、恒溫培養(yǎng)箱、微量移液器、離心機、凝膠成像系統(tǒng)。 - 試劑：瓊脂糖、非洲馬瘟標(biāo)準(zhǔn)抗原/抗體、待檢血清樣本、pH緩沖液、染色劑（如考馬斯亮藍(lán)）。其中，標(biāo)準(zhǔn)抗原和抗體需符合OIE或國家標(biāo)準(zhǔn)，確保檢測的準(zhǔn)確性和可比性。

檢測方法與步驟

試驗流程分為以下關(guān)鍵步驟： 1. 瓊脂板制備：將瓊脂糖溶解于緩沖液中，倒入平皿形成均勻凝膠層。 2. 打孔與加樣：在凝固的瓊脂板上按六邊形圖案打孔，中央孔加入標(biāo)準(zhǔn)抗原，周圍孔依次加入待檢血清和陽性/陰性對照。 3. 擴(kuò)散反應(yīng)：將瓊脂板置于濕盒中，37℃孵育18-24小時，觀察抗原與抗體形成的沉淀線。 4. 結(jié)果判讀：若待檢血清孔與中央抗原孔間出現(xiàn)清晰沉淀線，且與陽性對照一致，則判定為陽性。

檢測標(biāo)準(zhǔn)與質(zhì)量控制

非洲馬瘟瓊脂免疫擴(kuò)散試驗需遵循以下標(biāo)準(zhǔn)： - 國際標(biāo)準(zhǔn)：OIE《陸生動物診斷試驗和疫苗手冊》中規(guī)定的AGID操作規(guī)范。 - 國家標(biāo)準(zhǔn)：如中國《非洲馬瘟診斷技術(shù)》（GB/T 22915-2008）中的瓊脂擴(kuò)散試驗要求。質(zhì)量控制要點包括：使用經(jīng)認(rèn)證的參考品、規(guī)范樣本處理流程、設(shè)置雙重復(fù)孔及嚴(yán)格的環(huán)境溫控。出現(xiàn)非特異性反應(yīng)時需通過重復(fù)試驗或補充方法（如ELISA）驗證。

總結(jié)

瓊脂免疫擴(kuò)散試驗作為非洲馬瘟診斷的基礎(chǔ)技術(shù)，在疫情監(jiān)測和防控中具有不可替代的作用。其標(biāo)準(zhǔn)化操作與嚴(yán)格質(zhì)控是確保結(jié)果可靠的關(guān)鍵，結(jié)合分子生物學(xué)方法（如PCR）可進(jìn)一步提升檢測效率與準(zhǔn)確性。