根據(jù)前期預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定攻毒量，建立重癥EV71小鼠模型，9日齡BALB/c乳鼠輕度麻醉后，經(jīng)腹腔注射10^4.5 TCID₅₀臨床分離株NX10-147 (GenBank登錄號KJ004556)，攻毒劑量為250 μl/只；空白對照組乳鼠(n=12)腹腔注射等量RD細(xì)胞上清，其中3只取其血清作為對照組血清。分別在3、6、12 hpi 和1、2、3、5、7、9 dpi采集每組各3只乳鼠血清以備檢測血清中的細(xì)胞因子。在3 dpi和5 dpi每組各剖殺3只乳鼠，立即取其腦干、脊髓、肺臟、后肢骨骼肌和空腸固定在4 %多聚甲醛中，以備組織病理學(xué)檢測；同時(shí)，每組另剖殺3只乳鼠取以上組織凍存，以備病毒RNA提取和組織內(nèi)病毒定載量測定。