APP基因位于染色體21q11.2-22.2上，由18個(gè)外顯子和17個(gè)內(nèi)含子組成?；虍a(chǎn)物為跨膜糖蛋白，由APP基因通過(guò)選擇性剪切翻譯而成。APP至少有六種剪接形式，長(zhǎng)度分別為365、563、695、714、751、770個(gè)氨基酸殘基，其中695、751和770為主要形式。APP695主要在大腦表達(dá)，尤其在AD病人的海馬回和皮層中APP695與APP751的比率異常，且與腦中這些部位斑塊的數(shù)量呈正相關(guān)。由APP編碼的APP蛋白經(jīng)過(guò)加工水解可產(chǎn)生β淀粉樣蛋白（β amyloid， Aβ）。病理情況下，APP經(jīng)過(guò)β分泌酶和γ分泌酶分解生成Aβ40和Aβ42，其中Aβ42與AD患者腦中Aβ沉積和神經(jīng)元的變性密切相關(guān)。在家族性AD患者中已鑒定出多個(gè)APP基因的突變位點(diǎn)。其中大部分突變位于外顯子16和17的分泌酶裂解位點(diǎn)或APP跨膜區(qū)，如APP瑞典突變（APPswe：APP K670N和M671L）和倫敦突變（APPlon：APPV717I）。APP突變可改變APP的加工過(guò)程，導(dǎo)致具有神經(jīng)毒性作用的Aβ42產(chǎn)生，引發(fā)多種病理機(jī)制，促使神經(jīng)細(xì)胞凋亡或死亡，最終導(dǎo)致AD的發(fā)生。

構(gòu)建帶有神經(jīng)特異性啟動(dòng)子的質(zhì)粒PrP-hAPP695^K595N/M596L，用顯微注射法將線性化轉(zhuǎn)基因質(zhì)粒注射到C57BL/6J小鼠受精卵中，以C57BL/6J小鼠作假孕受體

2、基因型鑒定

提取首建鼠后代鼠尾DNA，PCR擴(kuò)增，1%瓊脂糖凝膠電泳，結(jié)果如圖1。

圖1. PCR鑒定APPswe轉(zhuǎn)基因小鼠的凝膠電泳分析結(jié)果。

1-2：陰性小鼠；3-8：APPswe轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性小鼠；9：Marker；10：陽(yáng)性對(duì)照

3、APP蛋白在APPswe轉(zhuǎn)基因小鼠腦中的表達(dá)鑒定 

免疫組化：

抗人APP抗體免疫組化染色顯示轉(zhuǎn)基因小鼠大腦皮層和海馬神經(jīng)元胞質(zhì)陽(yáng)性染色，神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞及細(xì)胞間質(zhì)未見(jiàn)陽(yáng)性著色。陰性對(duì)照組小鼠皮層和海馬神經(jīng)元胞質(zhì)染色陰性。

圖2、抗人APP抗體免疫組化染色結(jié)果。