BALB/c Mouse

（1）將galectin-7CDNA序列輸入網(wǎng)上的基因沉默片斷選擇軟件，選擇沉默的發(fā)夾DNA。DEFINITION  Mus musculus lectin, galactose binding, soluble 7 (Lgals7)CDNA

C A G C G A C T G G C C A C A T T G T GATGGAAAGGGAGGAGCTGAACCACTACCTTGCCTTTACTTAAGGTCCCCTCCCACAGCGACTGGCCACATTGTTGCTGTATTGCTGTGCCCGCCATGTCTGCTACCCAGCACAAGACCTCCCTGCCTCAGGGCGTCCGCGTGGGCACTGTCATGAGAATTCGAGGCATGGTCCCTGACCAGGCTGGCAGGTTCCATGTAAACCTGCTATGCGGTGAGGAGCAAGGAGCAGATGCCGCCTTGCACTTTAACCCGAGGCTGGACACTTCCGAGGTTGTCTTCAACACCAAAGAACAAGGCAAATGGGGCCGTGAGGAGCGAGGCACCGGCATCCCCTTCGAGCGTGGGCAGCCCTTTGAAGTGCTCCTCATCGCCACAGAGGAAGGCTTCAAGGCTGTGGTCGGGGATGACGAATATCTCCACTTCCACCACCGGATGCCGCCCGCGCGCGTGCGCTTGGTGGAGGTGGGCGGAGACGTGCAGCTGCATTCAGTGAAGATCTTCTAAGCAAGGACCCAAGGGCGTGGCGGGTAGGGGTGGGGGTGTAGGATCGCAGAGGAGGGTTTTGGATGGCGAATAAAGTGTAGCTGTAGTTCTG

（2）分別合成3個不同位置galectin-7CDNA的正義和反義發(fā)夾DNA。

（3）將正義和反義序列退火，并通過連接酶與基因沉默載體p-silencer5.1連接。

（4）通過酶切確定沉默載體構(gòu)建完成

（5）通過細(xì)胞培養(yǎng)和基因沉默載體轉(zhuǎn)染，檢測不同發(fā)夾的基因沉默效率

基因沉默效率細(xì)胞水平上的Western檢測

（6）選擇沉默效果高的發(fā)夾，通過核基因注射把p-silencer5.1中的啟動子和發(fā)夾基因轉(zhuǎn)入小鼠的核基因（7）首建鼠仔代基因鑒定，利用PCR引物鑒定發(fā)夾基因是否轉(zhuǎn)入。

基因沉默首建鼠PCR檢測

上游引物5’ATCCTCCCTTTATCCAGC 3’

下游引物 5’ GAGGGCCTATTTCCCATG  3’

退火溫度51度，產(chǎn)物大小392 BP

（8）首建鼠仔代Western Blot鑒定基因的沉默效果。

沉默鼠Western Blot檢測