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化合物+蛋白質(zhì)檢測

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發(fā)布時(shí)間：2025-07-25 08:49:03 更新時(shí)間：2025-07-24 22:11:09

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作者：中科光析科學(xué)技術(shù)研究所檢測中心

化合物+蛋白質(zhì)檢測的重要性和背景介紹

化合物+蛋白質(zhì)檢測是現(xiàn)代生物醫(yī)藥研究和臨床診斷中的關(guān)鍵分析技術(shù)，在藥物開發(fā)、疾病診斷、生物標(biāo)志物發(fā)現(xiàn)等領(lǐng)域具有不可替代的作用。隨著蛋白質(zhì)組學(xué)和代謝組學(xué)研究的深入，同時(shí)檢測化合物與蛋白質(zhì)的需求日益增長。這種復(fù)合檢測能夠幫助研究人員理解藥物-蛋白質(zhì)相互作用、評估生物標(biāo)志物的臨床價(jià)值、研究代謝調(diào)控機(jī)制等重要科學(xué)問題。在藥物研發(fā)過程中，化合物+蛋白質(zhì)檢測可以同時(shí)監(jiān)測藥物代謝產(chǎn)物和相關(guān)靶蛋白的表達(dá)變化；在臨床診斷領(lǐng)域，這種技術(shù)可用于發(fā)現(xiàn)疾病相關(guān)的代謝和蛋白標(biāo)志物組合，顯著提高診斷的特異性和靈敏度。隨著質(zhì)譜技術(shù)和免疫檢測方法的進(jìn)步，化合物+蛋白質(zhì)聯(lián)合檢測的靈敏度和通量不斷提高，已成為轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究和精準(zhǔn)醫(yī)療實(shí)施的重要技術(shù)支撐。

具體的檢測項(xiàng)目和范圍

化合物+蛋白質(zhì)檢測涵蓋的檢測項(xiàng)目主要包括：1)小分子化合物及其代謝產(chǎn)物檢測，包括藥物、內(nèi)源性代謝物、環(huán)境污染物等；2)各類蛋白質(zhì)檢測，包括酶、抗體、細(xì)胞因子、結(jié)構(gòu)蛋白等；3)化合物-蛋白質(zhì)復(fù)合物檢測。檢測范圍涉及：1)血液、尿液、腦脊液等生物體液樣本；2)細(xì)胞和組織樣本；3)藥物制劑和生物制品。具體應(yīng)用場景包括：1)藥代動(dòng)力學(xué)研究中的藥物和靶蛋白同步監(jiān)測；2)疾病生物標(biāo)志物的多組學(xué)篩查；3)蛋白質(zhì)修飾(如磷酸化、糖基化)與小分子代謝關(guān)聯(lián)研究；4)藥物-靶蛋白相互作用分析等。

使用的檢測儀器和設(shè)備

化合物+蛋白質(zhì)檢測主要使用以下儀器設(shè)備：1)液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用系統(tǒng)(LC-MS/MS)：用于小分子化合物和蛋白質(zhì)的定性與定量分析，特別是高分辨質(zhì)譜(如Q-TOF、Orbitrap)可實(shí)現(xiàn)兩者的同步檢測；2)免疫分析平臺(tái)：包括酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)、電化學(xué)發(fā)光免疫分析(ECLIA)等，主要用于特定蛋白質(zhì)的定量檢測；3)表面等離子體共振(SPR)儀：用于實(shí)時(shí)監(jiān)測化合物與蛋白質(zhì)的相互作用動(dòng)力學(xué)；4)毛細(xì)管電泳系統(tǒng)：用于分離復(fù)雜樣本中的化合物和蛋白質(zhì)；5)蛋白芯片和小分子芯片：可高通量篩查多種蛋白質(zhì)和小分子的相互作用。此外，樣品前處理設(shè)備如固相萃取儀、蛋白質(zhì)消化系統(tǒng)等也是完成高質(zhì)量檢測的重要保障。

標(biāo)準(zhǔn)檢測方法和流程

化合物+蛋白質(zhì)檢測的標(biāo)準(zhǔn)流程包括：1)樣本采集與保存：根據(jù)檢測目標(biāo)選擇合適的生物樣本，并采用適當(dāng)?shù)谋４鏃l件(如-80℃冷凍)；2)樣本前處理：a)蛋白質(zhì)提取和消化(使用尿素、SDS等變性劑和胰蛋白酶)；b)小分子化合物提取(常用有機(jī)溶劑沉淀、固相萃取等方法)；3)分離分析：a)LC分離：使用C18反相色譜柱分離小分子，使用納米LC或UPLC分離肽段；b)質(zhì)譜檢測：采用數(shù)據(jù)依賴采集(DDA)或數(shù)據(jù)非依賴采集(DIA)模式；4)數(shù)據(jù)處理：使用專業(yè)軟件(如MaxQuant、Skyline)進(jìn)行化合物和蛋白質(zhì)的定性和定量分析；5)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)：對重要發(fā)現(xiàn)進(jìn)行靶向驗(yàn)證(MRM/SRM)。對于免疫分析法，則包括包被、封閉、孵育、洗滌、信號檢測等標(biāo)準(zhǔn)步驟。整個(gè)流程需嚴(yán)格控制質(zhì)量，包括使用內(nèi)標(biāo)、標(biāo)準(zhǔn)曲線、質(zhì)控樣本等。

檢測結(jié)果的評判標(biāo)準(zhǔn)

化合物+蛋白質(zhì)檢測結(jié)果的評判需考慮以下標(biāo)準(zhǔn)：1)定量準(zhǔn)確性：與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)或參考方法的偏差應(yīng)在±15%(±20%在LLOQ附近)范圍內(nèi)；2)精密度：重復(fù)檢測的變異系數(shù)(CV)一般應(yīng)<15%；3)靈敏度：檢出限(LOD)和定量限(LOQ)需滿足研究需求；4)線性范圍：標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)(R2)通常應(yīng)>0.99；5)特異性：確保無顯著干擾物質(zhì)影響；6)穩(wěn)定性：樣本和標(biāo)準(zhǔn)品在規(guī)定條件下應(yīng)保持穩(wěn)定。對于藥物-蛋白質(zhì)相互作用研究，需評估結(jié)合常數(shù)(KD)、解離常數(shù)(Kd)等參數(shù)；對于生物標(biāo)志物研究，需評估受試者工作特征曲線(AUC)等診斷性能指標(biāo)。所有結(jié)果應(yīng)進(jìn)行適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)學(xué)分析，并根據(jù)研究目的設(shè)置合理的顯著性水平(p值)和效應(yīng)量閾值。