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HE染色

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發(fā)布時(shí)間：2024-05-21 08:15:32 更新時(shí)間：2025-06-09 16:28:07

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作者：中科光析科學(xué)技術(shù)研究所檢測(cè)中心

　　蘇木精染液為堿性，可以將組織的嗜堿性結(jié)構(gòu)(如核糖體、細(xì)胞核及細(xì)胞質(zhì)中的核糖核酸等)染成藍(lán)紫色;伊紅為酸性染料，可以將組織的嗜酸性結(jié)構(gòu)(如細(xì)胞內(nèi)及細(xì)胞間的蛋白質(zhì)，包括路易體、酒精小體以及細(xì)胞質(zhì)的大部分)染成粉紅色，使整個(gè)細(xì)胞組織的形態(tài)清晰可見。組織切片方法是教學(xué)、科研、病理檢驗(yàn)工作中非常常用的一種試驗(yàn)方法，HE染色是在制作切片的過程中最常用

（1）樣本組織固定與切片：首先將組織樣本進(jìn)行常規(guī)的石蠟包埋。在模具中加入液態(tài)石蠟，將待包埋的組織樣本放入石蠟中，確保組織位置規(guī)整。補(bǔ)充少許液態(tài)的石蠟后，進(jìn)行降溫冷凍，使石蠟變?yōu)楣虘B(tài)達(dá)到組織固定的效果，然后使用石蠟切片機(jī)進(jìn)行切片，厚度在４-８um左右。將切完后的組織切片放入載玻片上使用40℃溫水浸泡使組織充分伸展。

（2）組織樣本脫蠟：將待測(cè)組織樣本切片放于二甲苯中，充分浸泡10min，浸泡完后更換二甲苯繼續(xù)浸泡10min，目的是使用二甲苯將切片中的石蠟溶解，這樣可以在進(jìn)行染液染色的時(shí)候，染液可以充分進(jìn)入組織種，同時(shí)，二甲苯還可以起到透明的作用，使切片更容易觀察。

（3）組織樣本水化：將浸泡過二甲苯的待測(cè)組織樣本先放入無水乙醇中浸泡5min，使脫蠟時(shí)用的二甲苯可以被洗脫出去，使水可以進(jìn)入組織中；再依次置于95%、85%、70%乙醇中各浸泡５min以達(dá)到充分水化的效果。

染色.jpg

（4）組織切片蘇木素染色、分化與反藍(lán)：將水化后的組織樣本的切片使用PBS溶液浸泡清洗，每次浸泡５min，總共清洗３次。之后用移液槍吸取已經(jīng)預(yù)先配制好的蘇木素染色液，每個(gè)組織切片滴加100ul，充分染色10min。染色完畢后使用蒸餾水洗去多余的蘇木素染色液。然后再使用1%的鹽酸乙醇進(jìn)行分化，使細(xì)胞核中結(jié)合過多的染液和細(xì)胞漿中的多余的染液被除去。分化完成后，再用雙蒸水將組織切片沖洗干凈。為了使蘇木素染藍(lán)色，使用弱堿性的促藍(lán)液加入組織切片中，讓細(xì)胞核染藍(lán)色。反藍(lán)結(jié)束后先用清水進(jìn)行清洗，再用雙蒸水將組織切片沖洗干凈。

（5）組織切片伊紅染色與脫水：向上一步驟的組織樣本切片中加入伊紅染液，并使組織可以充分染色3min，染色完畢后，再將組織切片進(jìn)行梯度脫水，分別使用濃度為80%、95%以及無水乙醇進(jìn)行操作。80%的乙醇脫水5s，95%乙醇脫水2min，無水乙醇脫水2min。

（6）組織樣本切片風(fēng)干封片：將脫水后的組織樣本切片使用二甲苯浸泡２次，每次持續(xù)４min，然后將組織樣本切片干，并使用中性樹膠封片。

的染色方法