Tunel原理：
凋亡的一個(gè)特征是內(nèi)源性核酸內(nèi)切酶被激活，細(xì)胞自身的染色質(zhì)或 DNA 被切割，出現(xiàn)單鏈或雙鏈缺口，并產(chǎn)生與 DNA 斷點(diǎn)數(shù)目相同的 3’-OH 末端，地高辛標(biāo)記的 dUTP （ DIG-dUTP）標(biāo)記至 3’-OH 末端，與生物標(biāo)記的抗地高辛抗體（ Anti-DIG-Biotin）反應(yīng)后，再結(jié)合
鏈酶親和素-過(guò)氧化物酶（ SABC），然后加入顯色底物 DAB 予以顯示。

實(shí)驗(yàn)流程：

1.樣品處理；

 （1）細(xì)胞涂片和冰凍切片： 

 （2）組織： 

2.滅活；

3.消化；

4.  標(biāo)本片加標(biāo)記緩沖液(Labeling Buffer) 、TdT和、DIG-d-UTP ；

5.TBS 洗滌；

6.加封閉液 ；

7.加入生物素化抗地高辛抗體；

8. 加入 SABC；

9. DAB 顯色；

10. 蘇木素輕度復(fù)染、脫水、封片、顯微鏡觀察。
注意事項(xiàng)：

1、未打開(kāi)的試劑盒貯存在－20℃（－15～25℃），一旦解凍， 以后就保存在4℃（2～8℃）下，避免反復(fù)凍融。

2、初次檢測(cè)細(xì)胞凋亡，最好設(shè)置陽(yáng)性和陰性對(duì)照片。

3、血細(xì)胞含量高的組織，盡可能延長(zhǎng)過(guò)氧化氫的滅活時(shí)間。

4、使用新鮮的H2O2溶液，孵育后立即將標(biāo)本放入PBS清洗  （H2O2可導(dǎo)致DNA損傷）

5、假陽(yáng)性高是TUNEL檢測(cè)的一個(gè)主要缺點(diǎn)。觀察TUNEL陽(yáng)性片是應(yīng)對(duì)照HE切片。結(jié)合細(xì)胞HE染色來(lái)判斷陽(yáng)性的細(xì)胞 究竟是假陽(yáng)性還是真正發(fā)生了凋亡。

檢測(cè)機(jī)構(gòu)資質(zhì)證書(shū)

CMA認(rèn)證

檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)資質(zhì)認(rèn)定證書(shū)

證書(shū)編號(hào)：241520345370

有效期至：2030年4月15日

CNAS認(rèn)可

實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可證書(shū)

證書(shū)編號(hào)：CNAS L22006

有效期至：2030年12月1日

ISO認(rèn)證

質(zhì)量管理體系認(rèn)證證書(shū)

證書(shū)編號(hào)：ISO9001-2024001

有效期至：2027年12月31日

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