原位雜交(ISH)
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發(fā)布時間:2024-05-21 08:15:32 更新時間:2025-02-18 14:34:20
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在細胞或組織結(jié)構(gòu)保持不變的條件下,用標記的已知的寡核苷酸探針,按核酸雜交中堿基配對原則,與待測細胞或組織中相應(yīng)的基因片段相結(jié)合(雜交),所形成的雜交體 經(jīng)顯色反應(yīng)后在光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡下觀察其細胞內(nèi)相應(yīng)的RNA分子。
原位雜交步驟:
1.玻片處理;
2.組織處理;
3.切片處理;
4.滅活;
5.暴露 mRNA 核酸片段(消化);
6.預(yù)雜交;
7.雜交;
8. 雜交后洗滌;
9. 封閉;
10. 加生物素化鼠抗地高辛;
11. SABC顯色;
12.滴加生物素化過氧化物酶;
13. DAB 顯色;
14. 復(fù)染;
注意事項:
1、固定時間越長,mRNA破壞的越多;做原位雜交組織固定時間不宜過長,一般24h。
2、在整個雜交前處理過程都需戴消毒手套,避免RNA污染。
3、蛋白酶K的用量和作用時間要嚴格把握。
4、雜交后的洗滌均有助于減低背景染色,遵循鹽溶液濃度由高到低而溫度由低到高的原則。
證書編號:241520345370
證書編號:CNAS L22006
證書編號:ISO9001-2024001
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