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雞傳染性鼻炎瓊脂免疫擴(kuò)散試驗(yàn)檢測(cè)

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發(fā)布時(shí)間：2025-07-25 08:49:03 更新時(shí)間：2025-07-24 22:15:49

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作者：中科光析科學(xué)技術(shù)研究所檢測(cè)中心

雞傳染性鼻炎瓊脂免疫擴(kuò)散試驗(yàn)檢測(cè)概述

雞傳染性鼻炎（Infectious Coryza，IC）是由副雞嗜血桿菌（Avibacterium paragallinarum）引起的一種急性呼吸道傳染病，具有傳播快、發(fā)病率高等特點(diǎn)，對(duì)養(yǎng)禽業(yè)造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失。瓊脂免疫擴(kuò)散試驗(yàn)（Agar Gel Immunodiffusion，AGID）是一種經(jīng)典的血清學(xué)檢測(cè)方法，廣泛應(yīng)用于該病的抗體或抗原檢測(cè)。該方法通過抗原與抗體在瓊脂凝膠介質(zhì)中的擴(kuò)散反應(yīng)形成可見的沉淀線，具有操作簡(jiǎn)便、成本低、特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，尤其適用于基層實(shí)驗(yàn)室的病原篩查和免疫效果評(píng)估。

檢測(cè)項(xiàng)目

瓊脂免疫擴(kuò)散試驗(yàn)主要用于檢測(cè)雞傳染性鼻炎的以下內(nèi)容：
1. 血清抗體檢測(cè)：評(píng)估雞群免疫后抗體水平，或感染后抗體動(dòng)態(tài)變化。
2. 病原抗原檢測(cè)：通過分離培養(yǎng)的病原菌提取抗原，驗(yàn)證其與標(biāo)準(zhǔn)抗血清的特異性反應(yīng)。

檢測(cè)儀器與試劑

實(shí)驗(yàn)需配備以下儀器與材料：
- 瓊脂糖凝膠板（厚度1.5-2mm，含0.8%-1%瓊脂糖）
- 電泳儀或恒溫培養(yǎng)箱（維持37℃反應(yīng)環(huán)境）
- 微量移液器及槍頭（精確加樣）
- 陽(yáng)性對(duì)照血清與標(biāo)準(zhǔn)抗原（需符合OIE或國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)）
- 染色劑（如考馬斯亮藍(lán)，用于顯色觀察）

檢測(cè)方法步驟

1. 樣品處理：采集雞血清樣本，56℃滅活30分鐘；病原抗原需經(jīng)超聲波破碎并離心取上清。
2. 瓊脂板制備：將瓊脂糖溶解于緩沖液（pH 7.2 PBS），傾注至平皿中形成均勻膠層。
3. 打孔與加樣：使用打孔器在瓊脂板上形成中心孔及周圍孔（孔徑3-4mm），中心孔加標(biāo)準(zhǔn)抗原，周邊孔依次加入待測(cè)血清和陽(yáng)性/陰性對(duì)照。
4. 擴(kuò)散反應(yīng)：將瓊脂板置于濕盒中，37℃孵育24-48小時(shí)，觀察沉淀線形成情況。
5. 結(jié)果判讀：若待測(cè)血清與抗原孔間出現(xiàn)清晰沉淀線，且與陽(yáng)性對(duì)照一致，則判定為陽(yáng)性。

檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)與判定

依據(jù)《動(dòng)物疫病診斷技術(shù)規(guī)程》（GB/T XXXX-XXXX）及OIE標(biāo)準(zhǔn)：
- 陽(yáng)性結(jié)果：抗原與抗體孔間形成連續(xù)、清晰的白色沉淀線。
- 陰性結(jié)果：無(wú)沉淀線或僅出現(xiàn)模糊痕跡。
- 注意事項(xiàng)：需排除非特異性反應(yīng)（如血清脂質(zhì)干擾），必要時(shí)進(jìn)行重復(fù)試驗(yàn)或結(jié)合PCR驗(yàn)證。

應(yīng)用意義與局限性

瓊脂免疫擴(kuò)散試驗(yàn)作為傳統(tǒng)血清學(xué)方法，雖靈敏度低于ELISA或分子檢測(cè)，但其成本低、操作便捷，仍是監(jiān)測(cè)雞群免疫狀態(tài)和早期感染篩查的重要手段。實(shí)驗(yàn)需嚴(yán)格把控試劑質(zhì)量與反應(yīng)條件，同時(shí)結(jié)合臨床癥狀和病原分離進(jìn)行綜合診斷。