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牛副結(jié)核病檢疫檢測

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發(fā)布時間：2025-07-25 08:49:03 更新時間：2025-09-15 08:17:14

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作者：中科光析科學(xué)技術(shù)研究所檢測中心

牛副結(jié)核病概述

牛副結(jié)核?。≒aratuberculosis）是由副結(jié)核分枝桿菌（Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis, MAP）引起的一種慢性、消耗性傳染病，主要感染牛、羊等反芻動物。該病以慢性腸炎、持續(xù)性腹瀉、進行性消瘦和產(chǎn)奶量下降為特征，對畜牧業(yè)經(jīng)濟造成重大損失。由于潛伏期長（2-5年）、早期癥狀不典型，且病原可通過糞便、乳汁等途徑傳播，檢疫檢測成為防控該病的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。國際動物衛(wèi)生組織（OIE）將其列為須通報疫病，我國也將其納入二類動物疫病管理范疇，強調(diào)通過科學(xué)檢測手段實現(xiàn)早期診斷和凈化。

主要檢測項目

牛副結(jié)核病的檢測項目主要包括病原學(xué)檢測、血清學(xué)檢測和分子生物學(xué)檢測三大類：
1. 病原學(xué)檢測：通過分離培養(yǎng)病原菌或顯微鏡觀察組織樣本中的抗酸桿菌，直接確認感染；
2. 血清學(xué)檢測：采用ELISA、補體結(jié)合試驗等方法檢測血清中MAP特異性抗體；
3. 分子生物學(xué)檢測：利用PCR、實時熒光定量PCR等技術(shù)檢測病原DNA，靈敏度高且特異性強。

常用檢測儀器

根據(jù)檢測方法的不同，需配套專業(yè)儀器設(shè)備：
- 細菌培養(yǎng)：恒溫培養(yǎng)箱、離心機、生物安全柜、熒光顯微鏡；
- ELISA檢測：酶標儀、洗板機、微量移液器；
- PCR檢測：PCR擴增儀、電泳系統(tǒng)、凝膠成像儀；
- 病理學(xué)檢測：組織切片機、染色設(shè)備。

檢測方法及流程

1. 細菌培養(yǎng)法：采集糞便或腸系膜淋巴結(jié)樣本，經(jīng)酸處理去除雜菌后接種于Herrold's卵黃培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)8-12周，觀察菌落形態(tài)并通過抗酸染色確認；
2. ELISA檢測：取血清樣本，使用商業(yè)化試劑盒（如IDEXX Paratuberculosis Screening Ab Test）按說明書操作，通過酶標儀讀取OD值，計算S/P比值判定陰陽性；
3. 實時熒光PCR：提取樣本DNA后，針對MAP特異性IS900基因設(shè)計引物，通過擴增曲線和Ct值判斷結(jié)果，可在4小時內(nèi)完成檢測。

檢測標準與判定

我國主要依據(jù)以下標準執(zhí)行檢測：
- GB/T 18645-2020《動物副結(jié)核病診斷技術(shù)》規(guī)定細菌培養(yǎng)和PCR為確診方法；
- NY/T 539-2016明確ELISA檢測的判定閾值（S/P≥0.3為陽性）；
- 國際參考：OIE《陸生動物診斷試驗和疫苗手冊》要求PCR檢測需包含IS900、ISMAP02和F57基因的復(fù)合擴增以提高特異性。

注意事項

檢測過程中需注意：
- 糞便樣本需低溫保存（4℃不超過7天，-20℃長期保存）；
- 血清學(xué)檢測可能出現(xiàn)與禽結(jié)核分枝桿菌的交叉反應(yīng)，需結(jié)合臨床表現(xiàn)綜合判斷；
- PCR檢測需設(shè)置內(nèi)參基因（如β-actin）以排除抑制劑干擾；
- 實驗室需達到生物安全二級（BSL-2）標準，防止氣溶膠污染。