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病毒性出血性敗血癥檢疫檢測

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發(fā)布時間：2025-07-25 08:49:03 更新時間：2025-09-15 08:17:04

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作者：中科光析科學(xué)技術(shù)研究所檢測中心

病毒性出血性敗血癥檢疫檢測概述

病毒性出血性敗血癥（Viral Hemorrhagic Septicemia, VHS）是一種由彈狀病毒科病毒引起的嚴(yán)重魚類傳染病，主要影響鮭科魚類（如虹鱒、大西洋鮭）和部分淡水魚類。該病以高死亡率、體表出血、內(nèi)臟器官損傷為特征，已被世界動物衛(wèi)生組織（WOAH）列為須申報的疫病。隨著全球水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，VHS的跨境傳播風(fēng)險顯著增加，因此快速、準(zhǔn)確的檢疫檢測技術(shù)對疫病防控和國際貿(mào)易至關(guān)重要。

VHS的傳播途徑包括水體、受污染設(shè)備及活魚運輸，其潛伏期為7-15天。早期診斷可顯著降低經(jīng)濟(jì)損失，而檢疫檢測需結(jié)合臨床癥狀、病理學(xué)特征及實驗室技術(shù)進(jìn)行綜合判斷。以下從檢測項目、儀器、方法及標(biāo)準(zhǔn)等方面詳細(xì)闡述VHS的檢測體系。

檢測項目

VHS檢疫檢測的核心項目包括：

病原學(xué)檢測：直接檢測病毒顆?；虿《竞怂幔绮《痉蛛x培養(yǎng)、RT-PCR檢測。
血清學(xué)檢測：通過ELISA或中和試驗檢測魚體中的特異性抗體。
分子生物學(xué)檢測：基于病毒基因序列的實時熒光定量PCR（qPCR）或基因測序技術(shù)。
病理學(xué)檢測：觀察魚體組織切片中的出血、壞死等病理變化。
環(huán)境樣本檢測：對養(yǎng)殖水體、底泥等介質(zhì)進(jìn)行病毒篩查。

檢測儀器

VHS檢測需依賴以下關(guān)鍵儀器設(shè)備：

PCR儀：用于病毒核酸擴(kuò)增，如傳統(tǒng)PCR儀和實時熒光定量PCR儀。
酶標(biāo)儀：配合ELISA試劑盒進(jìn)行抗體或抗原的定量分析。
細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)：用于病毒分離的EPC（Epithelioma Papulosum Cyprini）或BF-2細(xì)胞系。
顯微成像系統(tǒng)：觀察細(xì)胞病變效應(yīng)（CPE）及組織病理學(xué)特征。
核酸提取儀：自動化提取樣本中的RNA，提高檢測效率。

檢測方法

VHS的實驗室檢測方法主要包括以下四類：

病毒分離與鑒定：將病魚組織勻漿液接種至敏感細(xì)胞系，觀察CPE并通過免疫熒光或電鏡確認(rèn)病毒。
RT-PCR/實時熒光定量PCR：針對病毒G蛋白基因設(shè)計引物，擴(kuò)增特異性片段（如OIE推薦的靶標(biāo)序列）。
ELISA檢測：使用單克隆抗體檢測病毒抗原或血清中的IgM抗體。
免疫組織化學(xué)：通過標(biāo)記抗體定位組織中的病毒抗原，輔助病理診斷。

檢測標(biāo)準(zhǔn)

VHS的檢疫檢測需遵循國際和國內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)：

OIE《水生動物衛(wèi)生法典》：規(guī)定VHS的診斷流程和報告要求。
GB/T 15805.5-2018（中國）：魚類病毒性出血性敗血癥診斷技術(shù)規(guī)范。
ISO/TS 15216-1:2017：水產(chǎn)品中病毒檢測的分子生物學(xué)方法通則。
農(nóng)業(yè)農(nóng)村部《一、二、三類動物疫病名錄》：將VHS列為二類疫病，要求強(qiáng)制檢測。

檢測實驗室需通過CNAS認(rèn)證，并定期參與WOAH的檢測能力驗證（PT），確保結(jié)果的可比性與可靠性。

總結(jié)

病毒性出血性敗血癥的檢疫檢測是水產(chǎn)疫病防控體系的核心環(huán)節(jié)。通過多技術(shù)聯(lián)用（如PCR結(jié)合病毒分離）、標(biāo)準(zhǔn)化操作及嚴(yán)格的質(zhì)量控制，可顯著提升檢測靈敏度和特異性。未來，隨著CRISPR等新技術(shù)的應(yīng)用，VHS的現(xiàn)場快速檢測將進(jìn)一步完善，為全球水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的可持續(xù)發(fā)展提供保障。