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藍(lán)舌病瓊脂免疫擴(kuò)散試驗(yàn)檢測

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發(fā)布時(shí)間：2025-07-25 08:49:03 更新時(shí)間：2025-07-24 22:14:54

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作者：中科光析科學(xué)技術(shù)研究所檢測中心

藍(lán)舌病瓊脂免疫擴(kuò)散試驗(yàn)檢測概述

藍(lán)舌?。˙luetongue Disease，BT）是由藍(lán)舌病病毒（BTV）引起的一種非接觸性蟲媒傳染病，主要感染反芻動(dòng)物，尤其是綿羊。該病被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）列為必須通報(bào)的疫病，對畜牧業(yè)造成重大經(jīng)濟(jì)損失。瓊脂免疫擴(kuò)散試驗(yàn)（Agar Gel Immunodiffusion Test，AGID）是檢測藍(lán)舌病病毒抗體或抗原的經(jīng)典方法之一，具有操作簡單、成本低廉、特異性較高等特點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于基層實(shí)驗(yàn)室和流行病學(xué)調(diào)查中。通過該試驗(yàn)，可快速確定動(dòng)物群體的感染狀態(tài)，為防控策略制定提供科學(xué)依據(jù)。

檢測項(xiàng)目

藍(lán)舌病瓊脂免疫擴(kuò)散試驗(yàn)主要檢測項(xiàng)目包括：
1. BTV抗體檢測：通過檢測血清中的特異性抗體，評估動(dòng)物是否感染或曾暴露于藍(lán)舌病病毒。
2. BTV抗原檢測：利用已知標(biāo)準(zhǔn)抗體驗(yàn)證樣本中是否存在病毒抗原，適用于病原鑒定。

檢測儀器與試劑

試驗(yàn)所需的核心儀器及試劑包括：
1. 水平電泳儀：用于瓊脂板的均勻鋪制和電泳條件控制。
2. 恒溫培養(yǎng)箱：維持37℃恒溫環(huán)境以促進(jìn)抗原抗體反應(yīng)。
3. 高速離心機(jī)：用于血清樣本的前處理。
4. 專用打孔器：在瓊脂板上制備標(biāo)準(zhǔn)孔陣。
5. 標(biāo)準(zhǔn)BTV抗原/抗體：由OIE認(rèn)證的參考實(shí)驗(yàn)室提供。
6. 瓊脂糖與緩沖液：配制1%-1.5%瓊脂凝膠，pH值調(diào)至7.2-7.4。

檢測方法與步驟

試驗(yàn)操作流程分為以下關(guān)鍵步驟：
1. 樣本制備：采集動(dòng)物血清，56℃滅活30分鐘后離心取上清液。
2. 瓊脂板制備：將瓊脂糖溶解于Tris-EDTA緩沖液，均勻倒入平皿形成3mm厚凝膠層。
3. 孔陣布局：采用中心-周圍六孔模式，中心孔加注標(biāo)準(zhǔn)抗原，周圍孔依次加入待測血清和陰陽性對照。
4. 免疫擴(kuò)散反應(yīng)：將瓊脂板置于濕盒中37℃孵育24-48小時(shí)，觀察沉淀線形成。
5. 結(jié)果判讀：待測血清孔與中心孔間出現(xiàn)清晰沉淀線為陽性，無沉淀線或僅對照孔出現(xiàn)為陰性。

檢測標(biāo)準(zhǔn)與質(zhì)量控制

試驗(yàn)需遵循以下國際及國家標(biāo)準(zhǔn)：
1. OIE標(biāo)準(zhǔn)：參考《陸生動(dòng)物診斷試驗(yàn)與疫苗手冊》中的AGID操作規(guī)程。
2. GB/T 22915-2008：中國藍(lán)舌病瓊脂免疫擴(kuò)散試驗(yàn)技術(shù)規(guī)范。
3. 質(zhì)量控制要求：每批次試驗(yàn)必須設(shè)置陽性對照（已知BTV陽性血清）和陰性對照（健康動(dòng)物血清），且陽性對照需呈現(xiàn)典型沉淀線，陰性對照無反應(yīng)方視為有效試驗(yàn)。

結(jié)論

瓊脂免疫擴(kuò)散試驗(yàn)作為藍(lán)舌病診斷的常規(guī)方法，在疫病監(jiān)測和防控中發(fā)揮著重要作用。盡管其敏感性低于ELISA或PCR方法，但在資源有限的地區(qū)仍具有顯著應(yīng)用價(jià)值。嚴(yán)格遵循標(biāo)準(zhǔn)化操作流程、規(guī)范試劑儲(chǔ)存條件以及定期進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室能力驗(yàn)證，是確保檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠的關(guān)鍵措施。