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結(jié)核病ELISA檢測(cè)

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發(fā)布時(shí)間：2025-07-25 08:49:03 更新時(shí)間：2025-07-24 22:14:51

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作者：中科光析科學(xué)技術(shù)研究所檢測(cè)中心

結(jié)核病ELISA檢測(cè)概述

結(jié)核?。═uberculosis, TB）是由結(jié)核分枝桿菌（Mycobacterium tuberculosis）引起的慢性傳染病，其早期診斷對(duì)控制疾病傳播和改善患者預(yù)后至關(guān)重要。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）作為一種高靈敏度、高特異性的血清學(xué)檢測(cè)方法，已被廣泛應(yīng)用于結(jié)核病的輔助診斷和流行病學(xué)研究。ELISA通過檢測(cè)患者血清中的結(jié)核特異性抗體或抗原，為臨床提供快速、可靠的實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。相較于傳統(tǒng)的痰涂片和培養(yǎng)法，ELISA具有操作簡(jiǎn)便、通量高、可標(biāo)準(zhǔn)化等優(yōu)勢(shì)，尤其適用于大規(guī)模篩查和資源有限地區(qū)的結(jié)核病監(jiān)測(cè)。

檢測(cè)項(xiàng)目

結(jié)核病ELISA檢測(cè)主要針對(duì)以下項(xiàng)目： 1. 抗體檢測(cè)：檢測(cè)患者血清中針對(duì)結(jié)核分枝桿菌的特異性抗體（如IgG、IgM），常用于活動(dòng)性結(jié)核感染的輔助診斷。 2. 抗原檢測(cè)：直接檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌的特異性抗原（如ESAT-6、CFP-10），可區(qū)分潛伏感染與活動(dòng)性結(jié)核病。 3. 細(xì)胞因子檢測(cè)：通過檢測(cè)IFN-γ等細(xì)胞因子水平，評(píng)估機(jī)體免疫應(yīng)答狀態(tài)，常見于γ-干擾素釋放試驗(yàn)（IGRA）。

檢測(cè)儀器

ELISA檢測(cè)需依賴專業(yè)設(shè)備以確保結(jié)果準(zhǔn)確性，核心儀器包括： 1. 酶標(biāo)儀（Microplate Reader）：用于測(cè)量反應(yīng)孔中的吸光度值（OD值），需具備450nm和630nm雙波長(zhǎng)檢測(cè)功能。 2. 洗板機(jī)（Plate Washer）：自動(dòng)化清洗反應(yīng)板，減少人為操作誤差。 3. 恒溫孵育箱：維持37℃恒溫環(huán)境以完成抗原-抗體結(jié)合反應(yīng)。 4. 移液器及多通道移液器：確保試劑添加的精準(zhǔn)度。推薦使用全自動(dòng)酶標(biāo)儀（如BioTek Synergy系列）以提高檢測(cè)效率和重復(fù)性。

檢測(cè)方法

結(jié)核病ELISA檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)操作流程包括以下步驟： 1. 樣品準(zhǔn)備：采集靜脈血，離心分離血清，避免溶血或脂血干擾。 2. 包被抗原：將結(jié)核特異性抗原（如38kDa蛋白）固定于微孔板。 3. 加樣孵育：加入待測(cè)血清和對(duì)照樣本，37℃孵育1小時(shí)。 4. 洗滌：使用PBS-T緩沖液去除未結(jié)合物質(zhì)。 5. 酶標(biāo)二抗結(jié)合：加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的二抗，孵育30分鐘。 6. 顯色反應(yīng)：加入TMB底物，避光反應(yīng)15分鐘后終止，讀取OD值。 7. 結(jié)果判讀：計(jì)算臨界值（Cut-off值），高于此值判定為陽(yáng)性。

檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)

結(jié)核病ELISA檢測(cè)需遵循國(guó)際和國(guó)內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)以確保結(jié)果可比性： 1. WHO指南：建議結(jié)合臨床表現(xiàn)和其他實(shí)驗(yàn)室檢查綜合判斷ELISA結(jié)果，避免單一檢測(cè)的假陽(yáng)性風(fēng)險(xiǎn)。 2. CLSI標(biāo)準(zhǔn)：規(guī)定試劑盒批內(nèi)和批間變異系數(shù)需<15%，靈敏度≥85%，特異性≥90%。 3. 中國(guó)衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)（WS 288-2017）：明確結(jié)核病診斷中ELISA的應(yīng)用范圍及質(zhì)控要求。 4. 實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證：檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室需通過ISO 15189或CAP認(rèn)證，定期參加室間質(zhì)評(píng)（EQA）。

結(jié)論

結(jié)核病ELISA檢測(cè)是結(jié)核病診斷體系的重要組成部分，其標(biāo)準(zhǔn)化操作和嚴(yán)格質(zhì)控是保證結(jié)果可靠性的關(guān)鍵。未來，隨著新型抗原（如Rv2031c）和化學(xué)發(fā)光技術(shù)的應(yīng)用，ELISA在結(jié)核病早期診斷和耐藥監(jiān)測(cè)中的作用將進(jìn)一步凸顯。