MERS感染的恒河猴、狨猴動(dòng)物模型成本較高、操作復(fù)雜，制約其在實(shí)驗(yàn)中大規(guī)模使用。建立一個(gè)經(jīng)濟(jì)實(shí)用的小動(dòng)物模型作為靈長(zhǎng)類模型的有益補(bǔ)充非常必要。BALB/c小鼠由于其良好的性能（遺傳背景均一、個(gè)體差異小等優(yōu)點(diǎn)）已被廣泛應(yīng)用于科學(xué)研究。然而B(niǎo)ALB/c小鼠缺乏MERS-CoV的受體DPP4( 亦稱CD26)，自然情況下是不能被感染的。

利用不同劑量DPP4轉(zhuǎn)導(dǎo)SPF級(jí)雌性BALB /c小鼠后建立MERS-CoV感染的動(dòng)物模型。

MERS-CoV (hCoV-EMC，GenBank: MH454272.1）由荷蘭伊拉斯姆斯大學(xué)醫(yī)學(xué)中心Ron Fouchier 教授饋贈(zèng)。Ad5-DPP4 由美國(guó)愛(ài)荷華大學(xué)微生物與兒科學(xué)教研室趙金存教授饋贈(zèng)。

DPP4 轉(zhuǎn)導(dǎo)組小鼠在MERS-CoV 攻毒前，滴鼻轉(zhuǎn)導(dǎo)Ad5-DPP4。高劑量DPP4 轉(zhuǎn)導(dǎo)組轉(zhuǎn)導(dǎo)劑量為2.5×10⁸ PFU/50μl/只，低劑量DPP4 轉(zhuǎn)導(dǎo)組轉(zhuǎn)導(dǎo)劑量為0.5×10⁸ PFU/50μl/只，PBS 對(duì)照組鼻腔滴入50μl PBS。DPP4 轉(zhuǎn)導(dǎo)處理后5 天，進(jìn)行MERS-CoV 滴鼻攻毒，攻毒劑量為5×10⁵TCID₅₀/50μl/只。觀測(cè)臨床癥狀和死亡情況。動(dòng)物安樂(lè)死后，取肺組織制備病理標(biāo)本，進(jìn)行HE染色和免疫組化染色。剩余3只進(jìn)行肺灌洗，用于病毒滴度和病毒載量測(cè)定。感染后14天，取血，分離血清用于IgG抗體和中和抗體檢測(cè)。

1、不同劑量DPP4轉(zhuǎn)導(dǎo)后MERS-CoV感染小鼠體征

MERS-CoV攻毒后，各組小鼠均無(wú)死亡。但DPP4轉(zhuǎn)導(dǎo)組小鼠均出現(xiàn)了明顯的感染癥狀，主要表現(xiàn)為精神不振、弓背、蜷縮、豎毛、活動(dòng)少、扎堆等（圖1A）。高劑量DPP4轉(zhuǎn)導(dǎo)組小鼠較低劑量DPP4轉(zhuǎn)導(dǎo)組小鼠癥狀更為明顯，持續(xù)時(shí)間也較長(zhǎng)。PBS對(duì)照組小鼠無(wú)任何臨床癥狀。攻毒后DPP4轉(zhuǎn)導(dǎo)組小鼠均出現(xiàn)明顯的體重下降，高劑量DPP4轉(zhuǎn)導(dǎo)組小鼠體重下降更為明顯。高劑量DPP4轉(zhuǎn)導(dǎo)組小鼠攻毒5d后體重開(kāi)始恢復(fù)，而低劑量DPP4轉(zhuǎn)導(dǎo)組小鼠攻毒3d后體重開(kāi)始恢復(fù)。而對(duì)照組小鼠體重變化不明顯（圖1B）。

圖1 小鼠MERS-CoV攻毒后臨床癥狀

（A：表型觀察；B：MERS-CoV攻毒后體重變化）

2、不同劑量DPP4轉(zhuǎn)導(dǎo)后MERS-CoV感染小鼠的病理學(xué)檢查

MERS-CoV感染后3d，大體解剖可見(jiàn)兩種劑量DPP4轉(zhuǎn)導(dǎo)組小鼠肺部均有不同程度充血呈暗紅色，而對(duì)照組小鼠肺部無(wú)明顯變化（圖2）。且高劑量DPP4轉(zhuǎn)導(dǎo)組小鼠肺部病變面積明顯大于低劑量DPP4轉(zhuǎn)導(dǎo)組小鼠。顯微病理檢查可見(jiàn)DPP4轉(zhuǎn)導(dǎo)組小鼠均發(fā)生間質(zhì)性肺炎，表現(xiàn)為肺泡隔中度到重度增寬，肺組織中可見(jiàn)少量到多量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)和漿液性滲出，炎細(xì)胞以巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和中性粒細(xì)胞為主。而對(duì)照組小鼠無(wú)此變化（圖3A）。免疫組化分析表明DPP4轉(zhuǎn)導(dǎo)組小鼠肺組織中可檢測(cè)到病毒蛋白的表達(dá)，陽(yáng)性細(xì)胞主要分布在肺組織的支氣管上皮細(xì)胞中。對(duì)照組小鼠肺中并未檢測(cè)到病毒特異蛋白的存在（圖3B）。

圖2 小鼠肺大體解剖圖（三角：正常肺組織；箭頭：肺部充血）

 

檢測(cè)機(jī)構(gòu)資質(zhì)證書(shū)

CMA認(rèn)證

檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)資質(zhì)認(rèn)定證書(shū)

證書(shū)編號(hào)：241520345370

有效期至：2030年4月15日

CNAS認(rèn)可

實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可證書(shū)

證書(shū)編號(hào)：CNAS L22006

有效期至：2030年12月1日

ISO認(rèn)證

質(zhì)量管理體系認(rèn)證證書(shū)

證書(shū)編號(hào)：ISO9001-2024001

有效期至：2027年12月31日

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